武汉大学医学院答辩PPT.ppt

To study Urumqi Municipality Uighur different caries sensitive children of Streptococcus mutans clinical isolates adhesion , synthesize exopolysaccharides and related gene polymorphism ;;;慢性细菌性、病程长、易忽视; 乳牙龋病是儿童口腔常见疾病，严重影响儿童身心发育及健康。 我国儿童乳牙患龋率很高，远远超过发达国家。 ;技 术 路 线 图;二、研究内容与方法;主要实验试剂与培养基;研 究 内 容;样本含量计算公式：;指标一 不同龋敏感儿童变链菌黏附能力比较;指标二 不同黏附能力菌株表面蛋白遗传多态性分析; ; 引物序列表 ;指标三 不同龋敏感儿童变链菌生物膜状态下合成EPS能力的比较;指标四 变链菌不同WIG合成能力菌株糖代谢相关基因遗传多态性的比较; ;引物序列表;统 计 方 法;三、结 果;2. 高龋及无龋组变链菌玻壁黏附比（%）;3.1 DNA定量 ;3.2 spaP-a PCR扩增产物电泳结果;3.3 PCR-RFLP结果分析;内切酶HaeⅢ识别5’-GG ↓ CC-3’ ，853bp-856bp处5’-AGCC-3’片段突变为5’-GG ↓ CC-3’，从而出现了B基因型;3.4 spaP-pv,spaP-c PCR扩增产物电泳结果; 3.5 PCR-RFLP结果分析;4. 蒽酮法测定胞外多糖含量;;5.1 gtfB PCR扩增产物电泳结果 ;5.2 PCR-RFLP结果分析;内切酶BsrI 识别5’- ACTGGN↓- 3’ ，B基因型1422bp位点碱基由A→G，导致1419-1424bp片段由5’- ACTAGC- 3’突变为5’- ACTGGC↓- 3’而产生B基因型;5.3 gtfC PCR扩增产物电泳结果;5.4 PCR-RFLP结果分析;5.5 srV+ PCR扩增产物电泳结果; 5.6 PCR-RFLP结果分析;内切酶DdeⅠ 识别5’-C ↓ TNAG-3’ ，B基因型710-714bp片段由5’-ATCAG-3’突变为5’-C ↓ TCAG-3’ ;四、讨 论;黏附能力及其基因多态性; 2. spaP-a基因在高黏附力组主要为A基因型，低黏附力组以B基因型为主。说明其具有基因多态性，提示由于GGCC位点的突变引起黏附能力降低，同时会造成菌株致病性减弱，表现为个体龋低敏感性。 3. AluI可以识别序列5’-AG ↓ CT-3’片段，spaP-c,spaP-pv酶切后未表现出基因多态性。推测由于本研究人群为少数民族儿童， AluI的酶切位点可能位于两基因的保守序列之内。;1.生物膜状态下，高龋组产生水不溶性葡聚糖量高于无龋组，推测变链菌水不溶性葡聚糖合成能力可以反映菌株致龋性的差异。 2.Gtfs酶活性的先决条件是结合葡聚糖能力??蔗糖通过Gtfs酶的活性合成水不溶性胞外多糖是最重要的毒力因子。 3.限制性内切酶BsrI和SspI对gtfB，gtfC基因进行酶切消化。 gtfB B基因型的出现对水不溶性葡聚糖的合成可能会起到减低作用，在一定程度上影响菌株的致龋能力。; 4. Renata等同样利用这两种酶分别对gtfB，gtfC基因片段进行酶切分析，发现它们经酶切后分别出现10种和5种基因型。与本研究结果相差较大，分析原因可能与研究人群的差异有密切关系。本研究对象在这两个酶切片段内可能存在更多的保守区域。;;展 望; ;攻读硕士学位期间发表的学术论文;致 谢;Thank You !