活体成像PPT.ppt

当共转染 pGL3-luc 或HCV-luc 表达载体特异的 siRNA时， 可抑制报告基因Luciferase的表达 McCaffrey et al, Stanford University School of Medicine, Nature, 2002 抑制荧光素酶 (pGL3-control) 抑制丙型肝炎病毒 (pShh1-Ff1) Stem Cell Research干细胞研究的应用 研究干细胞造血作用 Cao et al, Stanford University School of Medicine, PNAS, 2004 80 70 60 50 40 30 20 10 0 Total leukocytes Granulocytes B cells T cells 活体内蛋白质-蛋白质之间的相互作用 LUC N端 与 C端 分开时并不发光 蛋白质A 与蛋白质B 分别与LUC N端 和 C端 连接 两组蛋白质由不同的质粒诱导表达 蛋白A Luc N端 蛋白B Luc C端 蛋白A 蛋白B Luciferase 发光 相互作用 + Paulmurugan, et al, University of California, PNAS ,2002 R. Paulmurugan, et al, University of California, PNAS, 2002 活体动物体内观察细胞凋亡 Laxman et al, University of Michigan Medical School, PNAS 2002 Caspase site LUC I I LUC I I Caspase-3 site Caspase-3 activation 发光 Induction of apoptosis TRAIL激活Caspase 3的体内成像 Laxman et al, University of Michigan Medical School, PNAS 2002 Transgenic Animal Model (LPTATM Animal) 转基因动物模型的应用 基因激活 表达 生物发光 研究者可通过观察动物模型的生物发光，判断靶基因是否表达，既基因的“开”“关”现象。 转基因动物模型原理 生物大分子合成 血管内皮细胞生长因子受体2（VEGFR2）是VEGF的同源受体，VEGF在血管生成过程中分泌。Vegfr2-luc转基因小鼠应用从小鼠VEGFR2基因启动子及内皮细胞特异的增强子共4.5kb，以驱动荧光素酶表达。 转基因动物研究原理 通过观察发育过程中,VEGFR2-Luc转基因小鼠的VEGFR2表达逐渐降低,研究生物体的发育过程。 信号强度 Ning Zhang et al, Xenogen Corporation, BLOOD, 2004 已知，VEGFR2启动子活性在肿瘤坏死区域的血管内皮细胞中可被上调。Vegfr2-luc报告基因的活性可在皮肤创伤治愈过程中被诱导及在肿瘤特异的新血管形成中有潜在功能。 VEGFR-2在伤口愈合过程中的诱导表达 小鼠体内一发光点的三维整合图象 180o 225o 270o 315o 90o 135o 45o 0o 700 700 700 1400 1400 1400 4000 700 三维成像表面以彩色显示荧光对数值 活体生物体内成像技术In Vivo Imagine Technology 国家生物医学分析中心 活体生物体内检验是生物研究的最终验证 体外试验 （In Vitro） 分子生物学技术 克隆技术 蛋白组学 等等… 活体生物体内成像 （ In Vivo Imaging Technology） 体内反应 （In Vivo） 研究方法受体内环境制约，很难准确反映体内情况 体外检验 （ Ex Vivo） PCR 电泳 组织病理学 肿瘤称量 等等… 目前的活体生物体内成像技术和方向 超声（Ultrasound） 计算机断层摄影（Computed Tomography ，CT） 核磁共振（Magnetic Resonance Imaging ，MRI） 正电子衍射成像（Positron-Emission Tomography，PET） 单光子衍射(Single-Photon-Emission Computed Tomography,SPECT) 可见光及荧光成像(Optical Imaging with visible light and Fluorescence）--生物发光 （Bio