生物物理2PPT.ppt

蛋白质分子的特殊运动——折叠;分子生物学中心法则;给定一序列，它将怎样折叠成其特定结构？;蛋白质折叠研究的理论意义;蛋白质折叠研究的应用意义;Scrapie 羊瘙痒症;Prion疾病;PRION;PrPsc的增殖;目前已知的人类PRION疾病主要有：;Amyloidosis淀粉样变性病;有关蛋白质折叠的几项重要研究;变性条件;Native Protein Denatured;变性原理;蛋白质的功能决定于它们的天然构象，因而过去研究工作集中在蛋白质的天然构象上，而对变性态没有给予足够重视。近来，人们已知道蛋白质的非天然构象至少在以下三方面有重要作用： 1、蛋白质折叠和稳定性 2、蛋白质的跨膜运输 3、蛋白质的水解和更新;小分子蛋白质去折叠转变是可逆的。在周围环境的诱导下，小分子蛋白质发生去折叠，当将环境刺激因素去掉后，去折叠的蛋白质又可以在折叠。;一、问题的提出; 绝大多数的小蛋白质的去折叠与再折叠是可逆的 “一级结构不仅为空间结构编码，而且以某种方式规定指导着达到这种空间结构所经历的途径”——蛋白质折叠的密码／立体化学密码／第二密码。 折叠密码的复杂性：序列相近的蛋白取相同的空间结构；序列相同的肽段可以取不同的二级结构。 ;两个主要的考虑方向;Milestone; Anfinsen 对 Ribonuclease 的研究提出了蛋白质一级结构决定高级结构的假说。;二、 蛋白质折叠的热力学考虑;Anfinsen实验变性蛋白的复性实验;牛胰核糖核酸酶;Anfinsen实验;Anfinsen实验;巯基乙醇;脲变性;Anfinsen实验;错配的二硫键只需要加一点点巯基乙醇就可复性;Anfinsen实验;Anfinsen实验;同时代取得的其它一些结果;Levinthal Paradox;三、 折叠的动力学考虑;单一结构域的蛋白质，不存在平衡中间态。;折叠中间态的发现;折叠中间态?;快速检测蛋白质折叠的方法;通过二硫键捕捉中间体－－捕获二硫键;牛胰蛋白酶抑制剂的二硫键折叠途径;蛋白质折叠过程的时间尺度;多肽链能够采取的构象个数是个天文数字， 平均每个Aa可以有10种构象，100Aa的多肽链有10100种可能的构象。从一个构象转变为另一个构象所需最短时间10－13s，则该蛋白尝试所有的构象的时间是1085s=1077y，而人们观察到蛋白质体内、体外折叠的时间是10-1～10-3s. 结论：蛋白质的折叠不是随机尝试所有可能的构象直到遇到某个自由能最低的构象，而是沿着某些确定的途径进行的。蛋白质的天然构象未必是最低自由能的构象，而是动力学途径中所能得到的稳定的构象。;能量偏移限制了折叠过程中对不合理构象的尝试;对蛋白折叠过程的共识－－两种过程;蛋白质折叠的启动;1、局部肽段形成一些构象单元（?螺旋、?折叠和?转角等）——Motifs——三级结构； 2、肽链内部的疏水作用引起一个塌陷过程，然后经调整，形成不同层次的结构。 3、 “熔球态”的中间状态。在熔球态中，蛋白质的二级结构已基本形成，蛋白质的整体空间结构也初具规模。在熔球态时，分子立体的结构再作一些局部调整，最后形成正确的立体结构;蛋白质折叠的现代研究;折叠过程的动力学模拟;Baker D.等认为， 如果多肽链所采取的构象中只有一个低自由能状态，即天然构象，则所有非天然构象多肽链将遵循经典热力学假说，由高能态向低能态转变，最终形成天然构象。 但有些蛋白，天然构象也许并非是多肽链自由能最低的构象或唯一的低能构象，多肽链采取非天然的构象也很稳定，而这两种构象之间转变需要克服很高势垒而难以实现，那么蛋白质在折叠过程中就会有两种途径的竞争，一种是正确折叠形成天然构象，一种是错误折叠形成非天然构象。蛋白质之所以能够形成正确的构象，是由于一些因素在蛋白质折叠的动力学过程中起驱动作用。;“辅助性组装学说”;折叠酶;四、分子伴侣（chaperone）;定　　义;分子伴侣的特征;分子伴侣的分类;五、蛋白质折叠/去折叠的实验研究方法;Stopped-flow;典型停流实验结果;Continuous-Flow;时间分辨CD;Quench-flow H/D exchange;T-jump;Rise 1-20?C in 500 ns-10 ?s;Laser-induced T-jump;Laser flash photolysis;Mechanic unfolding with AFM