转染抑癌基因pt的en对人乳腺癌zr751细胞的细胞周期和增殖能力的影响.doc

转染抑癌基因PTEN对人乳腺癌ZR751细胞的细胞周期和增殖能力的影响 作者：李祥勇，林观平，周克元 【关键词】人乳腺癌ZR 【摘要】目的：观察PTEN（phosphataseandtensinhomologydeletedonchromosometen，第10号染色体上磷酸酶和张力蛋白同源缺失的基因）对人乳腺癌细胞ZR751细胞增殖和细胞周期的影响。方法：利用脂质体介导法将携带有野生型和突变型PTENcDNA的真核表达载体pBPwtPTEN和pBPG129RPTEN导入人乳腺癌ZR751细胞（质粒转染成功后实验分为CWTPTEN组、CG129RPTEN组和未转染质粒组即对照组）后，以RTPCR、Westernblot分析目的基因的表达，并采用MTT法和流式细胞术检测细胞增殖和细胞周期。结果：CWTPTEN组、CG129RPTEN组细胞PTENmRNA及PTEN蛋白出现明显的高表达。CWTPTEN组细胞生长的抑制率可高达42.7%，与对照组比较，差异有显著性(P0.05)。但CG129RPTEN组细胞生长的抑制率与对照组比较，差异无显著性(Pgt;0.05)。流式细胞术显示CWTPTEN组细胞周期从G1期到S期已发生抑制。结论：野生型PTEN可依赖其磷酸酶活性抑制肿瘤细胞的增殖，并最终诱导细胞凋亡。 【关键词】人乳腺癌ZR751细胞；PTEN基因；细胞周期 【Abstract】Objective:ToinvestigatetheeffectofthePTEN(phosphataseandtensinhomologuedeletedonchromosometen)geneoncellcycleandproliferationinhumanbreastcancercelllineZR751.Methods:TheeukaryoticexpressionvectorpBPwtPTENandpBPG129RPTENcontainingPTENcDNAwastransfectedintoZR751cellsbylipofectamine.Threegroupswereset:CWTPTEN,CG129RPTENandcellswithouttransfectionasthecontrolgroup.ReversetranscriptionpolymerasechainreactionandWesternblotmethodswereusedtodetectPTENexpressioninthetransfectedZR751cells.Thecellcycle,cellproliferationandcellapoptosisoftheZR751cellswasdeterminedbytheMTTandflowcytometry.Results:HighexpressionofPTENmRNAandproteinwasseeninthetransfectedZR751cells.TheproliferationofCWTPTENcellswereinhibitedby42.7%(vsthecontrolgroup,P0.05),whileCG129RPTENcellsshowednosignificantchangeinproliferation(vsthecontrolgroup,Pgt;0.05).ThecellcyclefromG1toSofCWTPTENcellswasinhibited.Conclusion:WidetypePTENgenemightsuppressthegrowthandinducestheapoptosisinhumanbreastcancercelllineZR751cellsthroughitsphosphataseactivity. 【Keywords】ZR751;PTEN;cellcycle;proliferation PTEN（phosphataseandtensinhomologydeletedonchromosometen，第10号染色体上磷酸酶和张力蛋白同源缺失的基因）是继p53基因之后新近发现的与各种肿瘤密切相关的一个抑癌基因，其突变与缺失见于多种恶性肿瘤，如前列腺癌、胶质瘤、乳腺癌等。目前发现PTEN是唯一一个编码具有双重磷酸酶活性的抑癌基因［1］，因其凭借磷酸酶活性负调控PI3K/Akt信号传导途径而备受关注。虽有研究表明，PTEN的缺失与突变与乳腺癌的发生fazhan发展密切相关［2］，然而目前有关PTEN基因对乳腺癌细胞生长抑制的作用多集中在对乳腺癌组织的研究，而PTEN基因转染对人乳腺癌细胞的研究不多。本实验以外源性PTEN基因导入该基因内源性缺失的乳腺癌细胞ZR751中，通过R