石 蜡 切 片PPT.ppt

* * 石 蜡 切 片 杨军玉 生物显微制片有许多不同的方法，一般可分为非切片法与切片法两大类： 非切片法有涂片，铺片，压片磨片，整装片等。 切片法又包括石蜡切片法，火棉胶切片法、冰冻切片法等。 1、制片方法 1、非切片法 即不用切片机，不经切片手续而制成切片的方法，根据材料性质的不同，有不同的处理方法，该类方法操作简单快捷，其中铺片法，封藏法可使原有组织结构不被破坏，涂片法，压片法弥补了用包埋，切片法所不可能观察清楚的不足，固此是显微标本制备的中常用的手段。 1.1 涂片法 主要用于 等不能切片成薄片的液态材料，可在载玻片上涂成单层细胞，再经固定，脱水，染色等手段制成永久标本 1.2 铺片法 主要用于动，植物组织的表皮层观察，可活体取待观察动，植物组织，用尖镊子撕去一层表皮，迅速平铺在载玻片上。 如: 洋葱表皮细胞的铺片制备。 1.3 压片法 一些较幼嫩，柔软的材料可将其置载玻片上，用小解剖刀将其分散，加染料一滴，再盖上盖玻片，用拇指垂直用力挤压，使组织散成一薄片，再进行观察，如植物根尖观察染色体，花粉粒观察发育阶段等。 1.4 离析法 该方法是利用化学试剂使组织的细胞间质溶解，使细胞能分散成单个个体。经染色，脱水，透明即可观察其个体形态，适用于肌肉，叶片，茎等部位 冷冻切片机 石蜡切片机 1、器材： 切片机、水浴锅、染色缸、玻片、显微镜、试剂瓶、剪刀、镊子、烘箱、离心管或青霉素瓶子。 2、试剂 苏木色精、伊红、二甲苯、中性树胶、酒精、石蜡、氨水、盐酸、蛋清、甘油。 3、材料 各类你感兴趣的固定标本。 2、石蜡切片 1、取材 2、固定 3、漂洗 4、脱水 5、透明 6、透蜡 7、包埋 步骤： 8、修块 9、切片 10、贴片 11、烤片 12、脱蜡 13、染色 14、封片 根据不同的实验目的，选择相应的材料，材料要求新鲜，准确，材料要避免挤压，挫伤，干枯。 所采集材料应立即放入固定剂，并编号，注明采集时间，地点，名称，组织部位，取组织块要大小适当。 一般组织学取材稍大，细胞学取材稍小，植物组织取材稍小，动物组织取材要稍大。 2.1 取材 动、植物的任何组织部位，要制成切片，首先用化学试剂将其固定，固定的作用在于通过固定剂，在尽量短的时间内使原生质体停止生命活动，并如同生前一样精细的保存其细胞结构，同时易于后步骤的染色。所以良好的固定剂应该具备以下条件： 2.2 固定 ①迅速渗入组织杀死原生质体，在短时间内，组织内外完全固定； ②尽可能避免使组织膨胀或收缩，并且软硬合适于切片； ③增加细胞内含物的折光程度，易于鉴别，同时增加媒染作用和染色能力； ④固定液同时是防腐液，使材料不致变质腐败。 简单固定液 以一种化学药品配制的固定液. ⑴ 乙醇 为凝固型固定剂。常用无水乙醇或95%乙醇。 ⑵ 甲醛 为非凝固性固定剂。具强烈刺激性气味.纯净的甲醛为无色透明液体。固定用的浓度为4%-10%。 ⑶ 醋酸 为凝固型固定剂。为无色透明的液体,刺激性极强,低温下凝结成冰,故又名冰醋酸.。 常用固定液 (4)F.A.A固定液 又称标准固定液,万能固定液。适用于一般根,茎,叶,花药,子房组织切片。在植物形态解剖研究上应用极广,此固定液最大优点是兼有保存剂作用,但对染色体的观察效果较差 配方:福尔马林(38%甲醛)5 ml: 冰醋酸5ml:70%酒精90 ml。 幼嫩材料用50%酒精代替70%酒精,可防止材料收缩;还可加入5 ml甘油(丙三醇)以防蒸发和材料变硬。 2.3 漂洗 固定后的组织材料需除去留在组织内的固定液及其结晶沉淀，否则会影响以后的染色效果。多数用流水冲洗；使用含有苦味酸的固定液固定的则需用酒精多次浸洗；如果组织经酒精或酒精混合液固定，则不必洗涤，可直接进行脱水 。 固定后或洗涤后的组织内充满水分，如不除去水分就无法进行以后的透明、浸蜡与包埋，因为透明剂多数是苯类，苯类和石蜡均不能与水相融合，水分不脱尽，苯类不能浸入。酒精为常用脱水剂，它既能与水相混合，又能与透明剂相混，为了减少组织材料的急剧收缩，应使用从低浓度到高浓度递增的顺序进行， 2.4 脱水 脱水是用一种即能与水又能与透明液混合的液体来逐渐置换样品中游离的水。 现采用的脱水剂一般是丙酮或乙醇来进行梯度脱水，脱水的时间，可根据组织的类型，大小而定。 脱水的过程：一般是30%乙醇→50%乙醇→70%乙醇→80%→90%→100% →100% 脱水应逐步而不应跨越太大的进行，否则将引起组织强烈的收缩或变形，在经无水乙醇处理时，应保证试剂的纯度。 透明是用一种即能与酒精又能与包埋介质