真核生物复制PPT.ppt

5. 错配修复 DNA链断裂的修复 非同源末端连接 non-homologous end-joining 同源重组修复 homologous recombination 7. 大肠杆菌SOS修复 Lex A， Rec A 修复完成后，DinI蛋白抑制RecA作用 Yeast two hybrid DNA损伤修复的调控机制 （1）G1期checkpoint，确保DNA损伤不被复制。这一阶段，DNA损伤激活蛋白激酶ATM，ATR和c－ABL，导致P53的磷酸化，并进一步上调P21 WAF1表达水平。P21可以结合cyclin-CDK从而调节细胞周期。同时DNA损伤诱导Cdc25A的泛素化和降解，从而阻止细胞周期进行； （2）S期checkpoint，主要是当DNA损伤在G1期没有能够进行修复时防止DNA复制； （3）G2期checkpoint，主要功能是当细胞在S期晚期或者G2期DNA受到损伤时，阻止细胞分离，从而防止DNA损伤传递到子代细胞中； （4）M期checkpoint，细胞在M期染色质将发生固缩形成纺锤体结构，在后期姐妹染色体发生分离。当染色体受到损伤时，细胞停滞在M期，染色体重新恢复到染色质，从而使细胞有机会对DNA损伤进行修复后再进入M期。 DNA损伤与细胞凋亡 DNA损伤 ATM/ATR丝/苏氨酸激酶 CHK1，CHK2，P53等 抗凋亡基因 凋亡相关基因 线粒体膜通透性升高，细胞色素C释放，激活Caspase 细胞凋亡 外源性因素：UV，射线，化学试剂等 内源性因素：线粒体呼吸链产生活性氧 reactive oxygen species（ROS），NO 50000个损伤/天×细胞 DNA损伤修复与疾病 细胞的保护机制 小分子如谷胱甘肽清除自由基 超氧化物歧化酶（SOD）：清除羟基自由基等 缺失导致肿瘤发生 遗传基因的突变，造成出生缺陷 肿瘤 影响细胞代谢，衰老 DNA损伤修复缺陷：胚胎致死或严重疾病 一些免疫抑制剂如环孢霉素A（cyclosporin A）、硫唑嘌呤（azathioprine）能插入到DNA链中，使得DNA对UV的敏感性增强，更容易导致DNA损伤，同时影响DNA损伤的核苷酸切除修复。环孢霉素A还能抑制细胞凋亡，促进肿瘤细胞生长，更增加了UV引起突变并致癌的风险。 Fair-skinned people DNA氧化损伤和肿瘤 MEF细胞体外培养的转化：DNA氧化损伤 NIH3T3成纤维细胞过表达NADPH 氧化酶增加细胞内过氧化物等产生，将促进细胞转化 过氧化物攻击DNA， 合成前体 着色性干皮病(xeroderma pigmentosum) 隐性遗传性疾病 核苷酸切除修复相关基因突变 对于光照极度敏感 患皮肤癌的几率比常人高2000倍 科凯恩综合症(Cockayne syndrome) 生长缺陷和渐行性的智力迟缓 范尼可贫血(Fanconi anemia) 同源重组修复的缺陷 DNA断裂或者交联形成损伤进行修复，其中FANC蛋白的突变将导致贫血 造血功能降低，并伴有身体的畸形 对DNA交联试剂如丝裂霉素C，顺铂敏感 第四节 DNA复制的调控 DNA复制是细胞增殖的一个关键事件，因此，DNA复制与细胞分裂是互相协调、互相调控的。 无论原核还是真核细胞中DNA复制都只发生在细胞周期中特定时期，在一个细胞周期中，DNA必须也只能复制一次。 一 大肠杆菌复制的调节 1、起始体 （ orisome，起始复合物，蛋白质-ori C复合物）的装配 参与形成orisome的组分： Dna A, Hu, IHF，Fis，Dpi， Ici A， Cnu，Hha，Rob，Seq A，Arc A 相互作用 ：Fis, IHF 调节 DnaA-ATP与oriC 的结合，HU调节DnaA, IHF 结合到oriC, 并增强DnaA解链能力。 2、防止复制再次起始 (1) Dna A活性的抑制 Dna A-ADP Dna A-ATP 无活性 RIDA 有活性 RIDA：regulatory inactivation of DnaA ori C (2) 降低游离形式的Dna A水平 Dna A结合位点 dat A区 在复制后极短时间内降低 Dna A 水平 可以结合300分子的Dna A (3)隔离 ori C ori C GATC CTAG 甲基化 未甲基化 摸板链 新合成链 Seq A 特异识别,并结合于半甲基化ori C