第15章 蛋白质合成PPT.ppt

第15章 生物遗传信息的传递（下）——蛋白质生物合成 ;遗传信息传递的 中心法则;一、 mRNA与遗传密码 蛋白质是由20种氨基酸组成的，不同的蛋白质中氨基酸排列顺序不同，这种排列顺序是按照基因中的碱基顺序决定的。;基因的遗传信息在转录过程中从DNA转移到mRNA，再由mRNA将遗传信息表达为蛋白质中氨基酸顺序的过程称翻译。 即蛋白质的生物合成过程。;蛋白质合成过程中需要200多种生物大分子参加，包括核糖体、mRNA、tRNA及多种蛋白质因子。 用体外翻译系统也可以进行蛋白质的生物合成。如细菌无细胞系统、动物无核细胞系统和麦胚系统等。只要加入外源mRNA模板，则可进行体外翻译。;1、 mRNA 原核细胞每个mRNA分子常带有多个功能相关蛋白质的编码信息，以一种多顺反子的形式排列，在翻译过程中可同时合成几种蛋白质； 真核细胞每个mRNA一般只带一种蛋白质编码信息，是单顺反子的形式。;原核mRNA;不同的蛋白质有各自不同的mRNA，mRNA除含有编码区外，两端还有非编码区。 非编码区对于mRNA的模板活性是必需的，特别是5’-端非编码区在蛋白质合成中可能是与核糖体结合的部位。 ;基因中各种序列的一般排列次序为： 启动信号— 5‘-端前导区(非编码区) —编码区—3‘-端尾序列(非编码区) — 3‘端终止子。;2 、遗传密码的破译 ⑴遗传密码 mRNA中蕴藏遗传信息的碱基顺序称为遗传密码。 mRNA分子上以5‘→3’方向，从AUG开始每三个连续的核苷酸（三联体）组成一个密码子(codon) 。;mRNA中的4种碱基可以组成64种密码子。这些密码代表了20种氨基酸，同时决定了翻译过程的起始与终止位置。 每种氨基酸至少有一种密码子，最多的有6种密码子。通过遗传学和生物化学实验，1966年编排出了遗传密码字典。;⑵遗传密码的破译 基因密码的破译先后经历了五十年代的数学推理阶段和1961-1965年的实验研究阶段。 物理学家George Gamov（1954）根据DNA中有4种核苷酸和蛋白质中有20种氨基酸的对应关系，推理认为3个核苷酸编码一个氨基酸，可编64种氨基酸(43=64) 是最理想的。;因为在有四种核苷酸条件下，64是能满足于20种氨基酸编码的最小数。 Brenner和Grick（1961）的实验研究证明此推理是正确???。 ;①均聚核苷酸指导均聚肽合成 Nirenberg和Mathaei（1961）合成了polyU作为模板，加入体外无细胞翻译系统中。将翻译产物分析后，发现合成的肽链中的氨基酸残基全部是Phe。确认了第一个Phe的密码子（UUU）。;以polyA和polyC为模板，证明了分别可指导合成polyLys和polyPro，确定了AAA是Lys的密码子，CCC是pro的密码子。 但类似的实验不能证明GGG是何种氨基酸的密码子，因为polyG产生牢固的氢键结合，形成三股螺旋，而不与核糖体结合。 ;②特定共聚核苷酸 Speyer等（1963）用2个碱基的共聚物破译密码的方法。 以A和C原料合成polyAC。polyAC含有8种不同的密码子：CCC、CCA、CAA、AAA、AAC、ACC、ACA和CAC。实验中AC共聚物作模板翻译出的肽链由6种氨基酸组成，即Asp、His、Thr、Pro和Lys，其中Pro和Lys的密码子已证明是CCC和AAA。;根据共聚物成份不同的比例和翻译产物中氨基酸比例亦不同的关系，确定了Asp、Glu和Thr的密码子含2AlC；His的密码子含1A2C；Thr的密码子也可以含1A2C；Pro为3C或1A2C；Lys为3A。 但此方法不能确定A和C的排列方式，而只能显示密码子中碱基组成及比例。;③核糖体结合技术 Nirenberg等（1964）建立了aa-tRNA与确定密码子结合实验的破译密码新方法。 在缺乏蛋白质合成所需的因子的条件下，特异 aa-tRNA可与核糖体-mRNA复合物结合。它并不一定需要长的mRNA分子，三核苷酸就可以与核糖体结合。 ;例如，当polyU与核糖体混合时，仅有Phe-tRNA与之结合；Pro-tRNA特异地与polyC结合等。 64个三核苷酸(密码子)都可按设想的序列合成，但有一些三核苷酸序列与核糖体结合不是很有效，因此不能确定它们是否能为特异的氨基酸编码。 ;硝酸纤维素滤膜;④重复共聚物(repeating copolymers)破译密码 Nishimura等人应用有机化学和酶学技术，制备了已知的核苷酸重复序列。蛋白质在核糖体上的合成可以在这些有规律的共聚物的任一点开始，并把特异的氨基酸参入肽链。;例如，重复序列CUCUCUCUCU......是多肽Leu-Ser-Leu-Ser... 或是Ser-Leu-Ser...的mRNA；使用共聚物构成三核苷酸为单位的重复顺