第2章 细胞培养技术与应用-2PPT.ppt

六、水产经济动物的细胞培养进展;1、鱼类; 鱼类细胞平均传代100 代仍可以继续分裂, 比起哺乳类, 分裂极限要大得多, 并且每一代细胞的存活期均较长;人和哺乳动物离体培养的正常二倍体细胞株寿命一般不超过50 代。; 1981年我国建立了最早的鱼类细胞系——草鱼吻端组织细胞系，至今已经建立了70余种细胞株（系），来自40多种鱼类。来源的组织有吻端、肾脏、卵巢、尾鳍、膘、性腺、肝脏、胚胎、囊胚、原肠胚、鳍条等。以淡水鱼细胞培养为主。海水鱼细胞的培养也越来越受到重视，如牙鲆鳃细胞系、鲈鱼脾和心细胞系、真鲷鳍细胞系、花鲈胚胎干细胞系、漠斑牙鲆胚胎干细胞系、大菱鲆鳍细胞系、点带石斑鱼脾脏细胞系等。; 鱼类细胞系的应用越来越广泛, 已由单纯的病毒培养分离、免疫学、毒理学、致癌作用、遗传学研究逐步向近些年研究很集中的基因组学、DNA 的复制与修饰、表观遗传学、基因敲除、RNAi 以及最新的iPS等各个方面发展。; 心脏、卵巢、鳃、胸腺、内脏、肌肉、淋巴、肝胰脏等组织以及胚胎都被尝试培养过。最易培养的组织依次是心脏、淋巴、卵巢、脑神经节、眼球。;虾类细胞培养的应用——病毒研究：杆状病毒(MBV)、黄头病毒(YHV）、白斑综合症病毒(WSSV)、皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV）、虾弹状病毒; 软体动物的数量仅次于节肢动物, 为动物界中第二大类群, 包括各种螺类、双壳类、乌贼和章鱼等。软体动物是细胞培养研究开展得最多的一类海洋无脊椎动物。; 19 世纪70 年代, 软体动物细胞培养就已取得了一些进展。在珍珠牡蛎外套膜组织培养中, 成功观察到了体外培养的外套膜细胞能够分泌有机物和进行有丝分裂的现象。但随后的珍珠牡蛎的外套膜组织培养却一直没有很大的进展。 1976 年, 建立起了第一个也是迄今为止唯一一个软体动物细胞系:淡水蜗牛担轮幼虫胚胎细胞系BGE 。至今没有解决海洋软体动物细胞的体外长期存活和成功传代建系的问题,即使是培养贝类的肿瘤组织也不例外。近年来, 海洋软体动物原代细胞培养物的应用研究开始增多。利用巨牡蛎的血细胞凝集实验来检测外源污染物的毒性效应。;贝类细胞培养;① 利用原??培养的栉孔扇贝血细胞探究了血细胞在细菌脂多糖的刺激下免疫相关基因CfToll-1 表达量的变化情况；研究苯并芘对栉孔扇贝血细胞的影响。 ②利用多种病原相关分子模式刺激培养的长牡蛎原代血细胞来研究相关基因表达随时间的变化情况。;贝类细胞培养面临的主要困难; 由于海绵特殊的细胞结构和生理特点, 使得海绵细胞培养面临很大困难, 进展缓慢, 仍停留在原代培养水平。主要有以下两个原因:(1)海绵动物多为合胞体，即整个生物体是由一个巨大的内有横隔片的多核细胞构成，通过胞内隔片上的孔道来进行细胞内的物质交换。分散培养的细胞在体外培养中很难存活和分裂。体外培养的海绵细胞相互接触后, 会彼此融合, 形成一个大的多核体, 结构与体内有着很大的不同；2) 海绵动物体内存在着多种内共生的微生物, 难以实现海绵细胞的无菌培养。如果不使用抗生素的话, 培养又只能维持1~3天。; 细胞分散技术对存活细胞的数量、组织培养的好坏和培养时间的长短都有很大影响。体外培养腔肠动物细胞的存活、贴壁和迁移对培养基质有着很严格的要求。在培养时, 多数腔肠动物细胞都只有与细胞外基质相接触时才能存活, 而且它们只有附着于由中胶层残片构成的基质上, 才能很好地贴壁、铺展和迁移。; 细胞分散技术对存活细胞的数量、组织培养的好坏和培养时间的长短都有很大影响。体外培养腔肠动物细胞的存活、贴壁和迁移对培养基质有着很严格的要求。在培养时, 多数腔肠动物细胞都只有与细胞外基质相接触时才能存活, 而且它们只有附着于由中胶层残片构成的基质上, 才能很好地贴壁、铺展和迁移。;棘皮动物的细胞培养研究开展得很少, 虽然棘皮动物具有无与伦比的再生能力,如海星臂的再生和海参的吐脏再生等。但是其细胞培养还是难获成功, 目前仍然停留在原代培养的水平上。; 最早在1993 年开始了对海参再生组织的细胞培养, 至40天时, 观察到再生肠组织来源的细胞团发生旋转和再生呼吸树来源的细胞团出现搏动现象。 最近, 对海参吐脏后不同再生阶段的肠组织进行了原代培养, 发现只有吐脏后第14～16 天的再生肠组织的原代培养物中, 能观察到活跃的细胞增殖, 细胞的数量于培养后第20 天加倍,而在其他再生阶段的肠组织原代培养物中均未观察到细胞分裂现象。;第五节细胞培养技术的应用;应用1 用细胞生产珍珠;珍珠的价值;药用珍珠;4%;药用、化妆品、中成药的主要原料（六神丸、安宫牛黄丸等），安神、平肝息风 。;天然海水珍珠;蚌科 三角帆蚌 （珠