第3章：细胞周期调控系统PPT.ppt

第三章：细胞周期调控系统 ;细胞周期调控系统： Cyclin:调节亚基 Cdk (cyclin dependent kinase)：催化亚基;多种控制细胞周期调控系统活化的方式;G1期：转录;G2期：磷酸化与去磷酸化;细胞周期调控系统的特性：;细胞周期调控系统的特性：;第一节 细胞周期蛋白依赖的蛋白激酶;细胞周期蛋白依赖激酶（Cdks）属于丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶家族，其成员都是小分子量蛋白质(～34-40kDa) 所有的Cdks都有一个共同的特征，即它们酶活性的激活需要结合细胞周期蛋白调节亚单位。 大部分情况，Cdks的完全激活还需要靠近激酶活性位点的苏氨酸的磷酸化。;动物细胞包括至少九种Cdks，其中只有四种（Cdk1,2,4,6）直接参与了细胞周期调控 ;Cdk功能在进化中高度保守。如果把酵母的Cdk1基因替换为人的Cdk1，酵母细胞依然能正常增殖。 Cdks能磷酸化几百种不同的蛋白质。Cdk蛋白识别的特定序列的丝氨酸或苏氨酸残基。 Cdks典型的磷酸化序列是[S/T*]PX[K/R]，其中S/T*是指磷酸化的丝氨酸或苏氨酸，X代表任意氨基酸，K/R代表碱性氨基酸赖氨酸（K）或精氨酸（R）。;小的氨基端小叶 大的羧基端小叶 ;T-loop;PASTAIRE螺旋 (也叫α1螺旋)与细胞周期蛋白直接作用，结合时向内移动，引起与ATP磷酸根作用的残基重新定向。;第二节 细胞周期蛋白Cyclin;一：细胞周期蛋白分四类;G1/S细胞周期蛋白：在G1期的晚期升高，在S期早期下降 ：启动DNA复制，中心体复制 S细胞周期蛋白：在S期升高。负责DNA复制，一次 M细胞周期蛋白：S-G2-M。负责有丝分裂纺锤体的装配，姊妹染色单体在纺锤体上的排列 G1细胞周期蛋白：浓度并不发生震荡变化，而是随着细胞的生长和细胞外生长调节信号出的存在，在整个细胞周期中的浓度逐渐增加。负责新细胞周期的设定。;一：细胞周期蛋白分四类;二、细胞周期蛋白的结构;细胞周期蛋白氨基末端区域的长度尤其不一样，包括了细胞周期蛋白特异的调控和靶向结构域。 S细胞周期蛋白和M细胞周期蛋白的氨基末端区域含有短的降解盒基序，能在有丝分裂期靶向蛋白酶解。;;细胞周期调控系统的活性受到多种因素的调节;使得Cdk2构象发生变化，最明显的变化发生在T环（T-loop）处，Cyclin的结合也使L12小螺旋转化为β链?? 使后面的T环发生重构，不再堵塞蛋白底物的结合位点，而是在缝隙入口处几乎平坦排列。;底物的靶向性： Cdks：T-环与底物的SPXK的保守序列作用。 细胞周期蛋白：疏水斑与底物上的RXL基序作用 Cks1：磷酸根结合袋的存在能使其靶向那些含有多个磷酸化位点的靶蛋白。;决定Cdk的底物特异性。位于cyclin表面称为疏水斑的区域，与含有互补疏水序列称为RXL（或Cy）的基序的底物以中度亲和力结合。 cyclin结合的也可以将Cdk带到其底物所在的空间部位。有些cyclin包含有序列信息，能够靶向自身和它们的Cdk同伴到特定的亚细胞部位。 ;活化磷酸化：不去磷酸化 抑制磷酸化：去磷酸化;(1) Cdk的活化磷酸化: Cdk活化激酶（CAK）催化、发生在邻近激酶活性位点的苏氨酸残基发生磷酸化。;磷酸化使T环变平，移向cyclinA，使Cdk和cyclin的相互作用更加稳定。 Thr160的磷酸化使T环能够有效地与含有SPXK保守序列的蛋白底物作用。;(2) Cdk的抑制磷酸化 由于Cdks的活化性磷酸化不受去磷酸化的调控，两种抑制磷酸化就在调节Cdk活性中起着重要作用：一个是保守的酪氨酸残基（人Cdks 的Tyr15），这存在于所有的Cdks中。附近的苏氨酸残基（Thr14）的磷酸化进一步阻碍了Cdk的活化。 Thr14和Tyr15位于激酶的ATP结合位点的顶端，它们的磷酸化可能通过干扰ATP磷酸根的方向而抑制Cdk活性。这些抑制性磷酸化位点的去磷酸化对cyclin-Cdks的激活至关重要，是开关样激活的关键开关位点。;蛋白激酶Wee1：负责Tyr15的磷酸化 蛋白激酶Myt1：催化Thr14和Tyr15的磷酸化 抑制性位点的去磷酸化由Cdc25家族的磷酸酶来执行。 ;抑制性位点的去磷酸化由Cdc25磷酸酶家族执行，Cdc25家族在脊椎动物中有三个成员（Cdc25A、Cdc25B、Cdc25C）。;两种酶都受到它们有丝分裂底物M期cyclin-Cdk复合物的调节：由M-Cdk导致的磷酸化抑制Wee1而激活Cdc25。因此，在有丝分裂开始阶段，M-Cdk激活了它自身的激活因子，抑制了自身的抑制因子，形成了正反馈环来产生开关样的Cdk激活。;尽管CKI的蛋白氨基酸序列的相似性很小，它们却拥有一些共同的重要功能特性。 第一，CKI主要是S-和M-Cdk复合物的重要抑制因子，在细胞