第5章 毛细管电泳PPT.ppt

第五章 毛细管电泳;5.1 毛细管电泳的基本原理;经典电泳分析;高效毛细管电泳分析 high performance capillary electrophoresis; 电压：0～30kV； 分离柱不涂敷任何固定液； 紫外或激光诱导荧光检测器； （可检测到：10-19～10-21 mol/L）;5.1.2 高效毛细管电泳(HPCE)基本原理;所以，迁移速度：;电渗现象与电渗流;2.HPCE中的电渗现象与电渗流;3.HPCE中电渗流的大小与方向;HPCE中电渗流的方向;4. HPCE中电渗流的流形;5. HPCE中电渗流的作用;HPCE中影响电渗流的因素 factors influenced electroosmosis;3. 电解质溶液性质的影响;Date;4. 温度的影响;5. 添加剂的影响;淌 度;HPCE中的参数与关系式 ;3.分离度 ;5.2 高效毛细管电泳仪;仪器流程与主要部件;1.高压电源;3.缓冲液池;毛细管电泳的进样方式; 毛细管一端插入样品瓶，加电压；;5.3 分离模式;一、毛细管区带电泳capillary zone electrophoresis ，CZE;二、毛细管凝胶电泳 capillary gel electrophoresis ，CGE; 1.缓冲溶液中加入离子型表面活性剂，其浓度达到临界浓度，形成一疏水内核、外部带负电的胶束。; 2. 电泳流和电渗流的方向相反，且ν电渗流 ν电泳 ，负电胶束以较慢的速度向负极移动；; 1. 根据等电点差别分离生物大分子的高分辨率电泳技术； 2. 毛细管内充有两性电解质（合成的具有不同等电点范围的脂肪族多胺基多羧酸混合物），当施加直流电压（6～8V）时，管内将建立一个由阳极到阴极逐步升高的pH梯度； 3. 氨基酸、蛋白质、多肽等的所带电荷与溶液pH有关，在酸性溶液中带正电荷，反之带负电荷。在其等电点时，呈电中性，淌度为零；; 4. 聚焦：具有不同等电点的生物试样在电场力的作用下迁移，分别到达满足其等电点pH的位置时，呈电中性，停止移动，形成窄溶质带而相互分离；; 1. 将两种淌度差别很大的缓冲液分别作为前导离子(充满毛细管)和尾随离子，试样离子的淌度全部位于两者之间，并以同一速度移动。 2. 负离子分析时，前导电解质的淌度大于试样中所有负离子的。所有试样都按前导离子的速度等速向阳极前进，逐渐形成各自独立的区带而分离。阴极进样，阳极检测。; 3. 不同离子的淌度不同，所形成区带的电场强度不同(ν=μE)，淌度大的离子区带电场强度小； 沿出口到进口，将不同区带依次排序1、2、3、4? ? ? ?电场强度依次增大。假设“2”号中离子扩散到“3”号，该区电场强度大，离子被加速，返回到“2”区；当“2”号中离子跑到“1”号区，离子被减速使之归队； 4. 特点：界面明显，富集、浓缩作用；; 在毛细管壁上键合或涂渍高效液相色谱的固定液，以电渗流为流动相，试样组分在两相间的分配为分离机理的电动色谱过程；;5.4 影响分离率的因素及操作条件的选择;3.焦耳热与温度梯度的影响 ;4.溶质与管壁间的相互作用 ;5.其他影响因素 ;5.5 毛细管电泳的应用;阴离子分析;药物分析 analysis of pharmaceutics;采用MEKC模式，鉴定违禁药物；效果优于HPLG法;手性化合物分析;氨基酸与蛋白质分析;蛋白质分析;核酸分析及DNA排序 analysis of nucleic acids and sequence of DNA;新进展advances and special topics;Thank you!