第三章 微生物的代谢与发酵PPT.ppt

(2)诱导物（inducer）与辅阻遏物（corepressor）—— 诱导物——是起始酶诱导合成的物质，如乳糖等；（与调节蛋白结合，抑制其与操纵基因 的结合促进转录进行）； 辅阻遏物——是阻遏酶产生的物质，如氨基酸和核苷酸等；（调节蛋白结合，促进其与操纵基因的结合抑制转录进行）； 它们都是小分子信号物质，常被总称为效应物（effecor），可与调节蛋白相结合以使后者发生变构作用，并进一步提高或降低与操纵基因 的结合能力。 (3)阻遏物（repressor）与和阻遏物蛋白（aporepresseor）——二者都是由调节基因编码产生特异性调节蛋白(regulatory potein)， ；它俩是一类低分子量变构蛋白，有两个结合位点，一个与操纵基因结合，另一位点可与效应物结合；当调节蛋白与效应物结合后，就发生变构作用，变构后与操纵基因的结合能力可提高或下降。（有活性——可与O结合；无活性——不与O结合） 阻遏物: 能在没有诱导物时与操纵基因结合的调节蛋白； 阻遏物蛋白:只能再有辅阻遏物存在时才能与操纵基因结合。 对数生长期的大肠杆菌（E.coli）培养基中加入乳糖诱导?-半乳糖苷酶的合成 正调节：转录过程依赖于调节蛋白的存在。 负调节：转录过程不依赖于调节蛋白的存在。 E.coli 乳糖操纵子学说(负调节） 第三节 微生物的代谢产物 一 分解代谢产物的生化反应 微生物生化反应是指用化学反应来测定微生物的代谢产物,生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物.因此微生物生化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之一. 1 糖发酵实验 不同的细菌具有不同的糖酶以分解相应糖类，而且分解各种糖类后的终末产物也不一致，有的产酸，有的还产生气体，籍此可以作为鉴别细菌的一种依据，对肠道细菌鉴定尤为常用。 结果： 在未接种细菌前，培养管应澄清、紫色、小倒立管内无气泡。接种细菌后观察结果时，应先确定细菌是否生长，生长时则培养基变混浊。若能发酵培养基中所含的糖而产酸，则该培养基变黄色，记录结果以“+”号表示之。如该菌发酵糖时产酸兼产气，则培养基除变黄色外，其中倒立之小玻璃管有气泡，此时以“⊕”号记录之。如不发酵时，培养基不变色，则用“-”号记录之。 糖发酵试验 2 V—P（Voges-Proslauer）试验 某些细菌能分解葡萄糖，产生丙酮酸，再将丙酮酸脱羧变为中性的乙酰甲基甲醇。乙酰甲基甲醇在碱性环境下，被空气中的氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨水中的精氨酸所含的胍基起反应，生成红色的化合物，即为V—P试验阳性。 方法：将大肠杆菌、产气杆菌分别接种于2支葡萄糖蛋白胨水。 37℃孵育48小时后，分别加入等量李氏（Leifson）试剂，摇匀后不加塞，静置30分钟观察结果，出现红色者为阳性反应。 VP试 验 阴性 阳性 大肠杆菌：— 产气杆菌：+ 3 甲基红试验 许多细菌如大肠杆菌等，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸再被分解，产生甲酸、乙酸、乳酸等。这样使培养基的pH降至4.5以下，这时加入甲基红试剂便呈红色。 分别接种大肠杆菌及产气杆菌于两支葡萄糖蛋白胨水中，置37℃孵育 18—24小时，滴加甲基红试剂数滴，立即观察结果。 甲基红为指示剂，变色范围为pH4.4（红色）—6.2（黄色）。若细菌分解葡萄糖产酸量少，或产生的酸进一步转化为其它物质（如醇、醛、酮、气体和水等），则培养基的酸碱度仍在pH6.2以上，故加入甲基红指示剂呈黄色。红色为阳性反应，黄色为阴性反应。 甲基红试验 阳性 阴性 对照 大肠杆菌：+ 产气杆菌：— 4 柠檬酸盐利用试验 在柠檬酸盐培养基中，柠檬酸钠为碳的唯一来源，磷酸二氢铵为氨的唯一来源。有的细菌如产气杆菌等，可利用柠檬酸盐作为碳源，能在此培养基上生长，并分解枸椽酸盐而最后产生碳酸，使培养基变碱性，这样培养基中的澳麝香草酚蓝指标由绿色变深蓝色，即为柠檬酸盐利用试验阳性。若细菌不能利用枸椽酸盐为碳源，在此培养基上就不生长，培养基则不变色，则为柠檬酸盐利用试验阴性。 方法：分别接种大肠杆菌、产气杆菌于2支柠檬酸盐培养基；37℃孵育24-48小时，观察结果，若有菌苔出现，培养基变为深蓝色则为阳性。 柠檬酸利用试验 大肠杆菌：— 产气杆菌：+ 5 靛基质（吲哚）产生试验 有些细菌能分解培养基中蛋白胨内的色氨酸形成靛基质（又称吲哚），靛基质为无色，不能直接观察，当加靛基质试剂（欧氏柯氏试剂）时，试剂中的对二甲基氨基苯甲醛与靛基质结合而成红色的玫瑰靛基质，则可为肉眼识别。 方法：取大肠杆菌蛋白胨水培养物及伤寒杆菌蛋白胨水培养物各一管，沿管壁徐徐加入靛基质试剂（约0.3ml），如在试剂与培养物接触面之间有玫瑰红色出现者为阳性。 大肠杆菌靛基质