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第三章 微生物的代谢与发酵PPT.ppt

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第三章 微生物的代谢与发酵PPT

(2)诱导物(inducer)与辅阻遏物(corepressor)—— 诱导物——是起始酶诱导合成的物质,如乳糖等;(与调节蛋白结合,抑制其与操纵基因 的结合促进转录进行); 辅阻遏物——是阻遏酶产生的物质,如氨基酸和核苷酸等;(调节蛋白结合,促进其与操纵基因的结合抑制转录进行); 它们都是小分子信号物质,常被总称为效应物(effecor),可与调节蛋白相结合以使后者发生变构作用,并进一步提高或降低与操纵基因 的结合能力。 (3)阻遏物(repressor)与和阻遏物蛋白(aporepresseor)——二者都是由调节基因编码产生特异性调节蛋白(regulatory potein), ;它俩是一类低分子量变构蛋白,有两个结合位点,一个与操纵基因结合,另一位点可与效应物结合;当调节蛋白与效应物结合后,就发生变构作用,变构后与操纵基因的结合能力可提高或下降。(有活性——可与O结合;无活性——不与O结合) 阻遏物: 能在没有诱导物时与操纵基因结合的调节蛋白; 阻遏物蛋白:只能再有辅阻遏物存在时才能与操纵基因结合。 对数生长期的大肠杆菌(E.coli)培养基中加入乳糖诱导?-半乳糖苷酶的合成 正调节:转录过程依赖于调节蛋白的存在。 负调节:转录过程不依赖于调节蛋白的存在。 E.coli 乳糖操纵子学说(负调节) 第三节 微生物的代谢产物 一 分解代谢产物的生化反应 微生物生化反应是指用化学反应来测定微生物的代谢产物,生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物.因此微生物生化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之一. 1 糖发酵实验 不同的细菌具有不同的糖酶以分解相应糖类,而且分解各种糖类后的终末产物也不一致,有的产酸,有的还产生气体,籍此可以作为鉴别细菌的一种依据,对肠道细菌鉴定尤为常用。 结果: 在未接种细菌前,培养管应澄清、紫色、小倒立管内无气泡。接种细菌后观察结果时,应先确定细菌是否生长,生长时则培养基变混浊。若能发酵培养基中所含的糖而产酸,则该培养基变黄色,记录结果以“+”号表示之。如该菌发酵糖时产酸兼产气,则培养基除变黄色外,其中倒立之小玻璃管有气泡,此时以“⊕”号记录之。如不发酵时,培养基不变色,则用“-”号记录之。 糖发酵试验 2 V—P(Voges-Proslauer)试验 某些细菌能分解葡萄糖,产生丙酮酸,再将丙酮酸脱羧变为中性的乙酰甲基甲醇。乙酰甲基甲醇在碱性环境下,被空气中的氧氧化为二乙酰,二乙酰与蛋白胨水中的精氨酸所含的胍基起反应,生成红色的化合物,即为V—P试验阳性。 方法:将大肠杆菌、产气杆菌分别接种于2支葡萄糖蛋白胨水。 37℃孵育48小时后,分别加入等量李氏(Leifson)试剂,摇匀后不加塞,静置30分钟观察结果,出现红色者为阳性反应。 VP试 验 阴性 阳性 大肠杆菌:— 产气杆菌:+ 3 甲基红试验 许多细菌如大肠杆菌等,分解葡萄糖产生丙酮酸,丙酮酸再被分解,产生甲酸、乙酸、乳酸等。这样使培养基的pH降至4.5以下,这时加入甲基红试剂便呈红色。 分别接种大肠杆菌及产气杆菌于两支葡萄糖蛋白胨水中,置37℃孵育 18—24小时,滴加甲基红试剂数滴,立即观察结果。 甲基红为指示剂,变色范围为pH4.4(红色)—6.2(黄色)。若细菌分解葡萄糖产酸量少,或产生的酸进一步转化为其它物质(如醇、醛、酮、气体和水等),则培养基的酸碱度仍在pH6.2以上,故加入甲基红指示剂呈黄色。红色为阳性反应,黄色为阴性反应。 甲基红试验 阳性 阴性 对照 大肠杆菌:+ 产气杆菌:— 4 柠檬酸盐利用试验 在柠檬酸盐培养基中,柠檬酸钠为碳的唯一来源,磷酸二氢铵为氨的唯一来源。有的细菌如产气杆菌等,可利用柠檬酸盐作为碳源,能在此培养基上生长,并分解枸椽酸盐而最后产生碳酸,使培养基变碱性,这样培养基中的澳麝香草酚蓝指标由绿色变深蓝色,即为柠檬酸盐利用试验阳性。若细菌不能利用枸椽酸盐为碳源,在此培养基上就不生长,培养基则不变色,则为柠檬酸盐利用试验阴性。 方法:分别接种大肠杆菌、产气杆菌于2支柠檬酸盐培养基;37℃孵育24-48小时,观察结果,若有菌苔出现,培养基变为深蓝色则为阳性。 柠檬酸利用试验 大肠杆菌:— 产气杆菌:+ 5 靛基质(吲哚)产生试验 有些细菌能分解培养基中蛋白胨内的色氨酸形成靛基质(又称吲哚),靛基质为无色,不能直接观察,当加靛基质试剂(欧氏柯氏试剂)时,试剂中的对二甲基氨基苯甲醛与靛基质结合而成红色的玫瑰靛基质,则可为肉眼识别。 方法:取大肠杆菌蛋白胨水培养物及伤寒杆菌蛋白胨水培养物各一管,沿管壁徐徐加入靛基质试剂(约0.3ml),如在试剂与培养物接触面之间有玫瑰红色出现者为阳性。 大肠杆菌靛基质

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