第二章 基因工程操作常规技术2(方)PPT.ppt

;PCR技术简史;5引物酶;TAGCGCTATCGCATCGACGCT GGAUCG;;;Mullis开车的时候, 瞬间感觉两排路灯就是DNA的两条链，自己的车和对面开来的车象是DNA聚合酶，面对面地合成着DNA……;PCR不只是一个方法改进;PCR仪器的变迁;PCR仪;72;94℃;50℃;72℃;94℃;50℃;72℃;;;;;;;;;;;; ;;; 1) 基因克隆; 2) 基因检测 内源性病变基因;遗传病的诊断;恶性肿瘤（癌基因或抑癌基因）;突变;父 父;现 嫌1;;高浓度引物; 2)反向PCR (reverse PCR) 是用反向的互补引物来扩增两引物以外的DNA片 段对某个已知DNA片段两侧的未知序列进行扩增。 可对未知序列扩增后进行分析,如探索邻接已知 DNA片段的序列；用于仅知部分序列的全长cDNA的 克隆,扩增基因文库的插入DNA；建立基因组步移文 库。;已知序列;3）多重PCR;;标记引物;用于扩增已知一端序列的目的DNA。在未知序列一端加上一段多聚dG的尾巴，然后分别用多聚dC和已知的序列作为引物进行PCR扩增。 ; cDNA 末端核酸转移酶;;;;;RNA template;PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5－3外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。;;;实时荧光定量PCR仪（TL988型）; 到2030年，预计只要1000美金就能得到个人的基因组序列。人与人之间平均1000个碱基对就有一个碱基呈多态性(SNP)。因此共有300万碱基上可能存在差异, 而真正有价值的SNP也许只有1－2万个。 防治基因信息的滥用和基因歧视，将是今后社会的重任。