第五章--酶的固定化PPT.pptVIP

1 第五章 酶和细胞的固定化 2 第一节 概述 第二节 固定化酶的性质及其影响因素 第三节 固定化酶的制备 第四节 固定化细胞 第五节 固定化辅酶和原生质体 第六节 酶反应器和固定化酶（细胞）的应用 主 要 内 容 3 第一节 概述 什么是酶？ 催化特定化学反应的蛋白质、RNA或其复合体。是生物催化剂，能通过降低反应的活化能加快反应速度，但不改变反应的平衡点。 绝大多数酶的化学本质是蛋白质。具有催化效率高、专一性强、作用条件温和等特点。 4 游离酶的缺陷： 大多数游离酶的稳定性比较差 ； 游离酶的使用成本较高； 一些游离酶存在自水解作用； 产物的分离提纯困难。 5 固定化酶的发展史 在20世纪20年代，就出现了酶工程，以自然酶制 剂在工业上大规模应用的特征，原料以动植物为主 1953年，Grubhoger Schleith 用重氮化聚氨基聚 苯乙烯树脂对羧肽酶、蛋白酶、核酸酶等进行固定， 产生了固定化酶技术。 7 1973年，日本首次在工业上固定化大肠杆菌菌体中天门冬氨酸酶，由反丁烯二酸连续生产L-天门冬氨酸 固定化死菌体 固定化细胞 固定化植物细胞 固定化原生质体 1976年，法国首次用固定化酵母细胞生产啤酒和酒精 1979年固定化毛地黄细胞和长春花细胞成功 1982年日本固定化黄色短杆菌原生质体生产谷氨酸 8 什么是固定化酶？ 固定化酶（Immobilized Enzyme）：通过物理的或化学的手段，将酶束缚于水不溶的载体上，或将酶束缚在一定的空间内，限制酶分子的自由流动，但能使酶充分发挥催化作用 9 固定化酶制备原则 （1）维持酶的催化活性及专一性； （2）有利于生产自动化、连续化； （3）应有最小的空间位阻； （4）酶与载体必须结合牢固； （5）应有最大稳定性，载体不与废物、产物或 反应 液发生化学反应； （6）成本要低。 10 固定化酶的优点 11 固定化酶的缺点 12 多次使用 可以装塔连续反应 优点： 纯化简单 提高产物质量 应用范围广 缺点： 首次投入成本高 大分子底物较困难 固定化酶的优缺点： 13 第二节 固定化酶的性质及其影响因素 一、影响固定化酶性质的因素 二、固定化后酶性质的变化 三、评价固定化酶的指标 14 一、影响固定化酶性质的因素 1、酶本身的变化，主要是由于活性中心的氨基酸残基、高级结构和电荷状态等发生了变化。 15 一、影响固定化酶性质的因素 2、载体的影响 （1） 构象效应 （2） 空间屏蔽效应 16 （3） 微扰效应 （4）分配效应：载体与底物带相同电荷-底物少；反之则多。 17 （5）扩散限制效应 外扩散限制 内扩散限制 18 二、固定化后酶性质的变化 1、固定化对酶活性的影响：酶活性下降，反应速度下降 原因：酶结构的变化 空间位阻 19 二、固定化酶的性质 固定化对酶稳定性的影响 （1） 操作稳定性提高。 （2） 贮存稳定性比游离酶大多数提高。 (3 ) 对热稳定性，大多数升高，有些反而降低。 (4 ) 对分解酶的稳定性提高。 （5） 对变性剂的耐受力升高。 20 2 、固定化后酶稳定性提高的原因： a. 固定化后酶分子与载体多点连接。 b. 酶活力的释放是缓慢的。 c. 抑制自降解，提高了酶稳定性。 21 3、pH的变化 pH对酶活性的影响： （1） 改变酶的空间构象 （2）影响酶的催化基团的解离 （3）影响酶的结合基团的解离 （4）改变底物的解离状态，酶与底物不能结合或结合后不能生成产物。 22 pH对固定化酶的影响： 1） 载体带负电荷，pH向碱性方向移动;载体带正电荷，pH向酸性方向移动。  23 3、pH的变化 2）产物性质对体系pH的影响 催化反应的产物为酸性时，固定化酶的pH值比游离酶的pH值高；反之则低 24 4、最适温度变化 一般与游离酶差不多，但有些会有较明显的变化。 5、底物特异性变化 作用于低分子底物的酶 特异性没有明显变化 既可作用于低分子底物又可作用于大分子低物的酶 特异性往往会变化。 25 6、米氏常数Km的变化，Km值随载体性质变化 （1） 载体与底物带相同电荷，Km’Km固定化酶 降低了酶的亲和力。 （2） 载体与底物电荷相反，静电作用，Km‘ Km 26 三． 评价固定化酶的指标： 1、酶活定义（IU)