共聚焦实验流程.docVIP

关机流程基本上是上述过程的反方向，但关闭氩离子激光器时一定要注意： 先将钥匙从“1”转到“0”，然后千万不要马上关闭电源，而是要等到风扇停止后再关闭氩离子。 其他有钥匙的电源装置关机的顺序是先关钥匙，后关电源（没有等待风扇停转过程）。 共聚焦显微镜使用注意事项和维护： 使用油镜后要及时用擦镜纸沾擦镜液（30％乙醇、70％乙醚混合液）擦干净。 遵守共聚焦系统的开机和关机流程，并注意严格遵守氩离子激光器关机顺序！ 不要用手收硬扳动显微镜电动部件，调节显微镜手动部件时，用力要轻，遇到阻力时不要强行调节。 尽量不要直接接触显微镜光学部件，不要弯折光纤。 不要随意插拔电源。 不要直视激光，以免损伤眼睛。 使用完毕后，等待仪器（尤其是光源部分）冷却后再盖上防尘罩。 如果外露光学部分如目镜、物镜和聚光镜被灰尘等污染，需要用擦镜液擦拭干净。 先开电源，后将开钥匙（从“0”转到“1”） 1共聚焦开机流程 打开荧光汞灯光源 注意“15分钟内勿开或关！！！” 双击进入共聚焦软件 HeNe红：633 应用染料：CY5/Alexa647等 HeNe绿：543 应用染料：TRITC/MT/CY3/PI/Alexa546等 氩离子：458/488/515 应用染料：GFP/FITC/Fluo3/Alexa488; CFP; YFP等 开激光器 （只开启使用的激光器） 打开显微镜电源UCB 打开电脑 打开PSU（扫描器总电源） （先开电源，后开钥匙） （如果使用双扫描，同时打开ASU） 5 选择合适的扫描分辨率。 （如果取时间或Z轴图像，应选择相应的XYT或XYZ扫描方式） 4 Zoom：原则上尽量使用高数值孔径物镜取图。同时尽量使用ZOOM功能选择最合适大小的扫描区域。 3 Seq： 如果双染或多染标本串色严重，在最后取图时，使用Seq模式，避免激发光串色。 1图像满足要求时，尽量使用低激光强度。并通过PMTHV（增强图像信号）， Gain（增强信号）和 offset（扣除背景）调节图像。 按下列事项设定获取图像模式后，按 取图（同时可以与下列功能结合使用） 2 Kalman ： 滤除随机噪音，次数越多降噪效果越好。在HV较高时使用。（另，降低扫描速度也能提高图质量） 或 在512X512下预扫，调节焦距、zoom、角度和用LUT调节标本颜色、反差 选择染料 共聚焦扫描 对应激发块：WU: DAPI; WIB: FITC/GFP; WIG: TRITC 粗、微调调节焦距，观察标本 1选择合适的激发块 2点击控制板上光闸按钮开/关光闸 3调节汞灯光阑，调整到合适光强 荧光：点击荧光 观察按钮 粗、微调调节焦距，观察标本 2共聚焦取图流程 1选择合适物镜（油镜需要滴加镜油） 2 调节合适光强 3 适当调节物镜下部的DIC旋钮 透射光：点击透射 光观察按钮 打开透射光“trans lamp” 执行开机程序 LD405（main）：应用染料：DAPI / Hoechst33258/BFP等 （先开电源后开钥匙） LD405（SIM）：应用：光漂白、光刺激、光活化等研究（先开电源后开钥匙） 如果不扫图像，可以只执行绿色部分流程