人感染猪链球菌病采样与实验室检测广东课件.pptVIP

人感染猪链球菌标本采集和实验室检测 省疾病预防控制中心 微生物检验所 2005年8月广州 概述 链球菌是化脓球菌中的一大类常见细菌，为链状排列的革兰氏阳性球菌。 分为致病性和非致病性两类。 本菌广泛分布于自然界：水、乳、尘埃，人及动物的粪便以及健康人的鼻咽部。 引起化脓性炎症、猩红热、丹毒、产褥热、以及链球菌变态反应性疾病。 形态与染色 链球菌为球形或卵圆形，呈单个、成对或数个排列的短链，也可排列成串珠状长链。 一般无鞭毛，不运动（D群某些菌株除外），不形成芽胞。。 革兰氏染色一般为阳性，陈旧培养物则多为阴性。 培养特性 致病链球菌在含血清和新鲜血的培养基上生长良好。一般常用新鲜血琼脂培养观察溶血现象。 本菌为需氧或兼性厌氧，但在无氧时溶血明显。 培养最适温度为37℃。 菌落细小，湿润，光滑，圆形，边缘整齐。 致病性链球菌多属于溶血性链球菌（β溶血） 有的菌株在病料中或含血清的培养基内能形成菌膜。 抗原结构 本菌具有一种特异性的多糖类抗原，又称为C抗原。用温热稀盐酸浸出的这种抗原与特异性抗血清作沉淀反应，可将溶血性链球菌进行血清学分类。 核蛋白抗原（P抗原），此抗原无特异性。 表面蛋白抗原，具有型特异性。 分类 按兰氏分类，目前确定的血清群有从A至V共20个群（其中缺I、J群）。 每个群结合生化和培养特性又分为若干型或亚型。 几乎所有的菌群，都能从病猪体内分离得到。 分类 根据溶血程度，将链球菌属分为： α-溶血性链球菌,菌落周围有草绿色溶血环，故称为草绿色链球菌。 β-溶血性链球菌，菌落周围有宽而透明的溶血环，故称为溶血性链球菌。 γ-溶血性链球菌，菌落周围无溶血环，故称为不溶血性链球菌。 致病性 化脓性链球菌是兰氏A群中唯一对人类致病的细菌，但A群链球菌对动物的致病性不强。 引起猪病并偶尔经伤口感染人的链球菌主要有：F群的咽峡炎链球菌，L、R、S、T、U、V群链球菌等。 国外近二十年报道较多，引起猪病并偶尔感染人，导致人重症感染的，主要是猪链球菌II型，它能引起人和猪的脑膜炎、败血症和关节炎，还可引起人的知觉性耳聋和中毒性休克综合征等。 猪链球菌所致的链球菌中毒性休克综合征病例的主要临床表现 突发高热，最高体温达42 ℃。 伴有头痛及腹泻等胃肠道症状。 皮肤瘀点、瘀斑，主要分布于四肢及头面部,不高出皮肤,无溃疡等。 最终致休克、少尿、死亡。 猪链球菌脑膜炎型综合征病例的主要临床表现 头痛。 高热。 均表现为脑膜刺激症状。 未见腹泻等胃肠道症状。 少见瘀点和瘀斑、休克、少尿等。 潜伏期均在2 日以内,多为几个小时。 标本采集-准备工作 无菌封闭性好的试管(最好使用负压采血 管)。 可以清楚标记且标记不易脱落的记号笔。 详细记录被采样病人的背景。 可以方便采集组织标本的无菌容器。 无菌的剪刀、镊子和手术刀。 血平皿和血培养瓶。 样品种类 现住院病人不抗凝全血（同时做血平皿或血培养瓶的床边接种培养） 。 新住院病人治疗前不抗凝全血（同时做血平皿或血培养瓶的床边接种培养）。 分别采集发病4-7天、10-16天的不抗凝全血。 尽量采集脑脊液标本（同时做血平皿或血培养瓶的床边接种培养） 。 尸体解剖应无菌采集肝、脾、心血、胸（腹）水。 病死猪也可进行解剖，取肝、脾、肾、心血。 标本采集程序 记录病人的姓名、家庭住址、发病日期、采样日期、性别、年龄等资料。 无菌抽取血液5-10ml和适量脑脊液标本置于无菌试管或者负压采血管中。 注：采集的同时在床边接种血平皿或者血培养瓶，然后放置于37℃培养，如有菌落生长根据条件应及时做初步鉴定，菌株送省CDC做进一步鉴定确认。 标本采集-注意事项 在标本采集过程中，注意使用一次性隔离服、手套、防护口罩等防护措施。 在标本采集过程中,严格采取预防措施，防止针头等锐器刺伤。 严格的无菌操作,防止污染标本。 标本运输以及保存 所有的原始标本在转运过程中应置于安全可靠容器中。 血清和脑脊液标本应在带有冰袋或者冰排的泡沫箱中运输。检测前可将标本暂放4-8℃冰箱，检测后置-20℃冰箱保存。 增菌液和培养皿可常温送检和保存。 猪链球菌检验程序 病人检样（脑脊液，血液，关节液） 增菌培养 （脑心肉汤） 革兰氏染色 （有G+成对球菌） 猪链球菌检验程序(续)