应用锝99m标记survivin反义寡核苷酸进行肝癌反义显像精品课件.pptVIP

应用锝-99m标记Survivin反义寡核苷酸进行肝癌反义显像的实验研究 华中科技大学协和医院 前 言 前 言 前 言 前 言 讨 论 结 论 * Survivin基因高表达于人类大多数恶性肿瘤、而在正常成人终末分化的组织中不表达或低表达,参与了肿瘤的发生、发展,与预后和肿瘤的耐药性也存在关联。 Survivin基因是一个极具潜在价值的癌基因。 从理论上讲,只要靶DNA或mRNA有过度的表达,便可以人工合成相应的反义寡核苷酸(ASON),制成核素标记的分子探针,利用核素显像设备达到早期、特异性地诊断和治疗诸如肿瘤、炎症等疾病,因此具有广阔的应用前景。 DNA RNA +antisense ﹡ γ Survivin反义寡核苷酸的99mTc标记 及标记物的分析 99mTc-Survivin-ASON在肝癌细胞和正常肝细胞中的动力学分析 99mTc-Survivin-ASON在正常小鼠及荷人肝癌裸鼠体内的生物学分布 荷人肝癌裸鼠99mTc-Survivin-ASON肿瘤反义显像研究 结 果 ?ASON的99mTc直接标记率为2.7﹪。 ?表明Survivin ASON的99mTc标记是通过螯合剂的偶联作用完成的,且标记成功。 Survivin ASON 的锝标记 860kBq/μg 1190kBq/μg 比活度 95% 94% 放化纯 50.56±5.45% 65.22±6.87% 标记率 99mTc-DTPA-ASON 99mTc-MAG3-ASON 在室温条件下,与生理盐水温育4 h、24 h后,99mTc-MAG3-ASON和99mTc-DTPA-ASON的放化纯分别为92﹪和91﹪、86﹪和84﹪。 99mTc-Survivin ASON 的稳定性 生理盐水 99mTc-Survivin ASON 的稳定性 在37℃条件下,与新鲜人血清温育至4h时,两种标记物的放射峰均未出现漂移;24h时,两种标记物放射峰均出现向前移动和变宽,且在峰的小分子量一侧出现多个小峰,其中以99mTc-DTPA- ASON较明显。 新鲜血清 99mTc-Survivin ASON 的稳定性 99mTc-Survivin ASON 在生理盐水中比较稳定,与血清保温4 h内其性质也基本稳定,但在4 h后会发生血清蛋白结合反应和受核酸酶的破坏。 血清蛋白 结合反应 新鲜血清 核酸酶 破坏 99mTc-Survivin ASON 的细胞动力学 99mTc-Survivin ASON 的生物学分布 At 4h and 12h postinjection in nude mice bearing tumor 99mTc-Survivin ASON 的生物学分布 At 4h postinjection in nude mice bearing tumor 接种后5周 荷人肝癌SMMC-7721裸鼠模型 静脉注射99mTc标记的Survivin 反义寡核苷酸探针后15 min,在荷人肝癌裸鼠中即可见肿瘤病灶部位有显像剂聚集,于4 h达到高峰;随着时间延长,病灶周围本底逐渐减低,肿瘤灶显影也更加清晰。 荷人肝癌裸鼠肿瘤基因显像 荷人肝癌裸鼠肿瘤基因显像 99mTc-Survivin ASON肿瘤显像,注射后4h见左大腿根部肿瘤病灶处有明显异常显像剂浓聚,箭头所示。右侧白色圆形浓聚灶为膀胱影。 荷人肝癌裸鼠肿瘤基因显像 99mTc-Survivin SON肿瘤显像,注射后4h见左大腿根部肿瘤病灶处仅有轻度显像剂浓聚,分布不均,箭头所示。腹部右侧红色浓聚灶为膀胱影。 事先注射未标记的Survivin ASON以封闭结合位点,60min后再注射99mTc-Survivin ASON探针,在注射标记寡核苷酸后4h肿瘤灶/对侧肌肉摄取比为0.93±0.23,较位点封闭前降低了62.5﹪。表明99mTc-Survivin ASON探针在肿瘤部位的聚集是特异性摄取。 荷人肝癌裸鼠肿瘤基因抑制显像 荷人肝癌裸鼠肿瘤基因抑制显像 99mTc-Survivin ASON肿瘤抑制显像,注射后4h见左大腿根部肿瘤病灶处显像剂浓聚程度明显降低,显像剂分布稀疏不均,箭头所示。 螯合剂的应用 ? Survivin 的99mTc标记需要用螯合剂 ? Survivin 的99mTc标记方法是可行的 ?S-acetyl-NHS-MAG3的偶联效果优于环DTPA酸酐 ? 环DTPA酸酐可作为候选的螯合剂 99mTc-Survivin ASON的特性 ? 在SMMC-7721肝癌细胞中有较高的摄取 ? 在L-02正常肝细胞中仅轻微摄取 ? 选择性的肝癌细胞摄取 ? 在体外性质稳定 *