第2章微生物的纯培养和显微技术PPT课件.pptVIP

微生物学教程;一、微生物接种技术;（二）实验材料;1．接种针 2.接种环 3.接种钩 4.5.玻璃涂棒 6.接种圈 7.接种锄 8.小解剖刀 ;（四）实验方法;（3）经常对接种室作无菌程度的检查。 （4）进入接种室前，应先做好个人卫生工作，换工作鞋，穿上工作衣，戴口罩。工作服、口罩、工作鞋只准在接种室内使用，不准穿着到其它地方去，并定期洗换和消毒灭菌。 （5）接种的试管、三角瓶等应做好标记，注明培养基、菌种的名称，日期。移入接种室内的所有物品，均须在缓冲室内用75%酒精擦拭干净。;1.斜面接种;2. 液体接种 （1）由斜面培养基接入液体培养基 此法用于观察细菌的生长特性和生化反应的测定。操作方法与前相同，但使试管口向上以免培养液流出。接入菌体后，使接种环与管内壁轻轻研磨，使菌体擦下。接种后塞好棉塞，将试管在手掌中轻轻敲打，使菌体充分分散。 （2）由液体培养基接种液体培养基 菌种如为液体时，接种除用接种环外，常用的还有无菌吸管或滴管。只需在火焰旁拔去棉塞，将管口通过火焰，用无菌吸管吸取菌液注入培养液内，摇匀。 ;3.三点接种法 要获得霉菌的单菌落，宜在平板上用三点接种法接种。即用接种针沾取少量霉菌孢子，在琼脂平板上点成等边三角形的三点。经培养后，每皿形成三个菌落。其优点不但在一个培养皿上同种菌落有三个重复，更重要的是在菌落彼此相接近的边缘，常留有一条狭的空白地带，此处菌丝生长稀疏，较透明，还分化出稀落的典型子实器，因此可以直接把培养皿放在低倍镜下观察，便于根据形态特点进行菌种的鉴定。这是单点接种法所难以做到的。;穿刺接种 （a）水平穿刺接种（b）垂直穿刺 ;;平板划线法;①用接种环以无菌操作挑取菌悬液一环，先在平板培养基的一边作第一次划线1～2条，再转动培养皿约70°角，并将接种环上剩余物烧掉，待冷却后通过第一次划线部分作第二次平行划线，再用同样的方法通过第二次划线部分作第三次划线和通过第三次平行划线部分作第四次平行划线。划线完毕后，盖上培养皿盖，倒置于温室培养。 ;2. 稀释分离法; 取稀释好的菌悬液0.1mL加入平板中，将冷却至45℃??右的琼脂培养基倒入平板中约10-15mL。迅速旋转培养皿,使培养基和稀释液充分混合,水平放置,待凝固后,倒置于到恒温培养箱中培养。;方法二: 涂布平板法;涂布法;三、显微镜的使用;几个基本概念：;1.显微镜的结构;显微镜的机械系统;显微镜的光学系统; 0.61 l 分辨率D（最小可分辨距离）= ———— NA ;显微镜的优劣主要取决于物镜分辨力的大小。;现在所用的油镜其α为600左右。影响数值孔径的另一 因素是介质的拆射率，不同介质的折射率是不同的。 ;很多原来由于在透镜及载片表面的反射和折射而损失的 光线可以进入物镜，使照明亮度提高，改善观察效果。; 因此，通常在物镜和标本之间加入香柏油作介质就可使数值孔径(NA)值增大到1.2-1.4。所以，当用数值孔径为1．25的油镜来观察标本时，就能分辨出距离不小于0.2μm的物体，而大多数细菌的直径在0.5μm左右，故在油镜下能看清其细微形态及某些构造。 ;光学显微镜物镜的特性;显微物镜的主要参数;3.具体操作;(2)低倍镜观察;（3）高倍镜观察;（4）油镜观察;上升镜筒，转动物镜转换器，使油浸物镜偏位；;将各部分还原，转功物镜转换器，使物镜头不与载物台通光孔相对，而是成八字形位置，再下降至最低，用柔软纱布清洁载物台等机械部分，然后将显微镜放回柜内或箱中。;香柏油的双层瓶 1. 香柏油 2.二甲苯 ;光学显微镜一般配置的最大放大倍数是多少？为什么？