RNAi在HBV感染中应用研究.doc

RNA干扰在HBV感染中的应用研究 摘要：近年来，科学家们发现了一种普遍存在的重要的基因调节机制，被称为RNA沉默或者是RNA干扰(RNA interference，RNAi)。RNA干扰是指由21~23个核苷酸组成的双链RNA(dsRNA)所引发的生物细胞内同源基因转录后沉默的现象，是生物体在进化过程中普遍存在的一种基因调控机制。目前对由乙型肝炎(HBV)引起的病毒性肝炎尚无令人满意的治疗效果，而RNA干扰技术的出现为各类慢性HBV感染的治疗开辟了新的途径,利用RNAi技术的高效性和特异性抵御病毒感染及其它外源性核酸入侵的研究，已取得了很大进展，针对乙肝病毒感染这一全球性的健康问题，RNAi有着广泛的应用前景。本文对RNA干扰抑制HBV复制及基因表达的研究现状、存在问题及应用前景进行了综述。 　　关键词：RNA干扰　HBV 抗病毒　 乙型肝炎病毒(HBV)的持续感染呈全球范围广泛流行。HBV感染可引起急、慢性肝炎和重型肝炎，并与肝硬化、肝癌的发病密切相关，是严重危害人类健康的感染性疾病 。全世界有超过三亿五千万乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)携带者，面临患慢性肝炎，肝硬化和肝细胞癌的危险［1］，其中75％分布在亚太地区，且慢性乙型肝炎预后不良.现有的治疗HBV的药物包括免疫调节剂和核苷类似物等虽能起到一定的作用，但疗效仍不令人满意［2］。高剂量重组干扰素的持续应答率仅约30％[3]，核苷类似物如拉米夫定虽然抗病毒活性较强，但停药后病毒复制水平快速反跳及耐药病毒株的出现，使得临床抗病毒方案的实施受到极大的阻碍 [4].。近年RNA干扰(RNA interference，RNAi)技术的出现，为各类慢性HBV感染的治疗开辟了新的途径。RNAi是指由双链RNA(dsRNA)分子mRNA水平关闭相应序列基因表达或使其沉默的过程。dsRNA可抑制不同类型细胞的靶向基因表达，用特异性的抗体几乎检测不到靶向基因所表达的蛋白质。因此，RNAi技术又被形象地称为基因沉默(gene silencing)。RNAi是一种典型的转录后基因 调控方法，又称转录后基因沉默(post transcriptional gene silencing，PTGS)。RNAi具有高特异性和高效性，已经被广泛应用于植物、真菌、蠕虫和低等脊椎动物以及哺乳动物的基因功能研究[5]。有学者认为，RNAi技术用于抗HBV治疗，有望成为治疗乙型??炎的革命性新方法，将有巨大的社会价值。 RNA干扰发现的历史背景　 RNA干扰机制的发现得益于许多科学家的长期工作。1 9 9 0年有科学家给矮牵牛花插入一种催红素色素的基因，希望它能够开得更鲜艳，结果让人大惊，矮牵牛花完全褪色了，花瓣变成了白色j研究者对此极度困惑；1 9 95年，中国留学生郭苏在美国康柰尔大学肯尼恩·坎菲斯指导下，试图阻断秀丽新小杆线虫的某个基因时，意外地发现反义和正义单链RNA都阻断了该基因的表达；可惜的是他们都没有能解释这个现象和继续研究下去。直到1 9 9 8年，安德鲁·法尔和克雷格·梅洛宣布他们发现了RNA (核糖核酸)具有可以干扰基因的机制。为以上现象找到了答案，矮牵牛花、线虫实验中所观察到的现象都是因为生物体内某种特定基因“沉默”了，导致基因“沉默”的原因就是R N A干扰机制。以前，人们都认为，RNA分子只是被当作是D N A (脱氧核糖核酸)与蛋白质之间传递遗传信息的“信使” ，安德鲁·法尔的研究让人们认识到，RNA可以使特定基因开启、关闭，从而影响生物的生长和发育等。2006年，瑞典皇家科学院诺贝尔奖评审委员会把2 0 0 6年诺贝尔生理学、医学奖授予美国科学家安德鲁·法尔和克雷格·梅洛，据诺贝尔奖评审委员会称，这两位科学家获奖是因为他们发现了R N A(核糖核酸)干扰机制即“发现了控制遗传信息流动的基本机制”。诺贝尔奖评审委员会授予美国科学家罗杰·科恩伯格诺贝尔化学奖，以奖励他在“分子水平上揭示真核生物基因信息转录过程”中的研究成就。瑞典皇家科学院在声明中说“如果转录过程停止，(生物)基因信息就不会被转移到机体的各个部位，生命体也将在数天内死亡” 。比如，人类现在难以攻克的多种疾病，癌症、心脏病都与基因信息转录过程发生紊乱有关。 HBV基因结构特征　 HBV基因组是一不寻常的特异性结构，它是一环形的部分霹股的DNA分子其中完整的链称为长链或负链［L（-）］， 由3200左右核苷酸组成， 短链又称为正链[S(+)]， 其核苷酸数目相当于长链的5O～100 ％条链的5 ＇-末端之间的碱基互补构成粘性末端，维持其环状结构。在粘性末端的两侧各有一个由11个碱基对(bp)(5＇ TTCACCTCTGC)组成的正向重复顺序(DR)，位于核苷酸1824和核苷酸1590，分另IJ称