漆酶在环境生物治理中的应用1.pptVIP

漆酶在环境生物治理技术中的应用 内 容 引言 一般的环境生物治理技术，都是直接利用微生物进行污染物的处理。 与直接利用微生物处理废水相比,酶制剂催化反应具有以下优点： 分解效率高 毒性小,易操作。微生物常常具有致病性，而酶对环境很友好，因为酶及其反应产物在环境中极易进一步被生物降解。 使用范围宽，酶可以在较宽的pH,温度及盐浓度范围内处理低浓度或较高浓度的污染物。而微生物一般仅适用于处理较低浓度的污染物。 引言 酶制剂的主要缺点是价格高，且易受各种因素（如盐的浓度，pH及有机溶剂等) 的干扰变性失活。但随着现代生物技术的发展,通过有效地分离、纯化、基因表达与重组技术。生产大量的、便宜的酶已成为可能。 通过使用新型的酶固定化技术，可明显提高酶的使用稳定性和重复利用率，从而可进一步降低其使用成本。 漆酶 漆酶(EC 1. 10. 3. 2) ,对-二酚: (双)氧氧化还原酶,又名酚酶、多酚氧化酶、漆酚氧化酶等,是一种含铜的糖蛋白氧化酶,是多铜氧化酶的一种[ 1 ]，属于氧化酶的蓝铜家族。 对漆酶的研究已有100多年的历史,是有记载以来开发最早的酶之一。1883年,日本人Yoshida在研究漆树的生漆漆液成分时发现这种酶成分,但当时他误为淀粉酶物质。漆酶也因此得名。 1898年,法国人Bertrand在研究越南产漆液的时候,首次提出了漆酶( laccase)的概念并沿用至今[ 2 ]。 漆酶来源 在自然界中, 漆酶分布于多种植物、几乎所有的真菌体内, 以及少数昆虫和细菌中。它们可以是分泌的酶，也可以定位在细胞内，因物种而异。 用于工业实践和科学研究的漆酶，其主要来源分为漆树漆酶和真菌漆酶两大类。而真菌漆酶也历来被人们用作研究漆酶的模式物。 漆酶来源 分泌漆酶的真菌主要集中于担子菌亚门( Basidiom ycotina) 、子囊菌亚门( Ascom ycotina) 及半知菌亚门( Deuterom ycotina) 等高等真菌, 其中最主要的是担子菌亚门的白腐真菌[3]。漆酶皆为糖蛋白, 其含糖量和种类因来源不同而有所不同。一部分菌株的漆酶由数种同工酶组成, 多为单体酶, 该酶具有广泛的底物专一性。 漆酶的性质 1 漆酶的分子特征 漆酶是一种糖蛋白,肽链一般由500 个左右氨基酸组成,糖配基占整个分子的10 %～45 %。糖组成包括氨基己糖、葡萄糖、甘露糖、半乳糖、岩藻糖和阿拉伯糖等。由于分子中糖基的差异,漆酶的分子量随来源不同会有很大差异,甚至来源相同的漆酶分子量也会不同[4] 。 漆酶的性质 2 漆酶的生化特性 漆酶能催化许多化合物的氧化反应,底物比较广泛,包括许多与对二酚结构类似的化合物,如氨基苯酚,邻、对苯二酚,多酚,多胺,木质素和芳基二胺等。一些漆酶能高效地氧化抗坏血酸,另外一些真菌漆酶还能催化木质素和甲氧基酚酸的脱甲基反应。必须注意的是过氧化物酶和其他一些多酚氧化酶也可以催化类似的反应,但这些酶不会利用分子氧作为第二底物,因此测定催化反应中氧吸收速率可以作为漆酶活性的可靠证据。漆酶的抑制剂大多是铜离子螯合剂,有卤化物、半胱氨酸、EDTA 和SDS 等,离子强度的不同也会影响酶的活力。 漆酶的催化机制 ???漆酶合适的底物分子是酚类，以及芳香性和脂肪性的胺类。它们催化的过程是底物的单电子氧化，生成相应的活性自由基。酶分子中含有4个铜原子构成的簇作为催化核心（图a），实施氧化还原过程。在催化核心中铜原子的相互作用引起了强烈的电子吸收，产生了典型的蓝色。 图b为漆酶催化的循环过程，1分子的氧被还原为2分子的水同时4个底物分子氧化产生4个自由基，这些活性的中间物随后转变为二聚体、寡聚体和高聚物。 ? ??漆酶催化的反应可以因为其他分子存在与否而分为3种不同的模式，见上图。最简单的模式是，只有一种底物分子，并不存在其它分子，如图 a?所示。在这样的情况下，酶直接催化底物的氧化，完成整个反应。第二种情况是，在酶和底物中存在着一个中介分子，通过中介分子的氧化还原过程，进行电子的传递，见图b。这种情况更常见，因为有时需要氧化的分子太大，无法与酶活性中心—铜簇接近，此时需要中介分子，或者因为底物分子的氧化还原电位太高，反应不能一次完成，此时也需要中介分子的帮助。图c所示的情况最复杂，在这种模式中，除了有中介分子外，还需含有黄素作为辅基的脱氢酶介导电子的传递。 生产[5] 在液体培养中, 对基础培养基进行优化时, 大多根据碳源、氮源、C/N 比、无机盐和微量元素对漆酶酶活的影响进行选择; 另外在培养基中加入某些天然物质, 配成半合成培养基对提高漆酶的产量也非常有利。 分离纯化 漆酶分离纯化时, 一般先用快速定性滤纸过滤最优发酵条件下的发酵液, 获得粗酶液, 然后利用盐析、等电点沉淀、有机溶剂分级