先行课动物细胞融合和单克隆抗体.ppt

动物细胞融合的概念 动物细胞融合（cell fusion）也称细胞杂交（cell hybridization），是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。 B淋巴细胞 动物在免疫过程中产生的抗体种类可达百万种 每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 因此，要想获得大量的单一抗体，必须克隆单一的B淋巴细胞，形成细胞群 但是： 一个B淋巴细胞在体外不能无限增殖 骨髓瘤细胞 * 提问： 哪种植物细胞工程技术可以突破不同生物之间的生殖隔离障碍，培育出新的作物类型？　　　　　 植物体细胞杂交技术 你能回忆出植物体细胞杂交的过程吗？ 植物体细胞杂交技术过程图 动物细胞融合 动物细胞融合的过程 请同学们阅读课本P52动物细胞融合 动物细胞融合 融合后形成的单核细胞称为杂交细胞 问题讨论 2、动植物细胞在结构上有何区别？这与它们杂交或融合过程有什么影响？ 3、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？那动物细胞融合呢？ １、植物体细胞杂交最终得到的是完整的植物个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗? 4、动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理是否相同？什么原理？ 5、为什么要用灭活的病毒？ 6、动物细胞融合有什么意义？ 2、动植物细胞在结构上有何区别？这与它们杂交或融合过程有什么影响？ 3、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？那动物细胞融合呢？ 离心、振动、电激等物理方法；PEG等化学方法 问题讨论 动物细胞无细胞壁，动物细胞融合过程中不须去除细胞壁和再生出细胞壁。 １、植物体细胞杂交最终得到的是完整的植物个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？ 　　不能，只能得到杂交细胞 4、动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？ 能 还可以利用灭活的病毒（生物方法）进行诱导 问题讨论 ５、动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理是否相同？ 　　相同，都是细胞膜的流动性 问题讨论 7、动物细胞融合有什么意义？ 6、为什么要用灭活的病毒？ 病毒一般对生物体是有伤害的。 仙台病毒 物理或 化学方法 丧失感染活性 保留融合活性 突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能。 动物细胞融合 杂种细胞 愈伤组织 杂种植株 植物细胞A 植物细胞B 原生质体A 原生质体B 植物体细胞杂交 去壁 融合 组织培养 物理法 化学法 生物法： 灭活的病毒 动物细胞A 动物细胞B 杂种细胞 主要用于制备 单克隆抗体 获得杂种植株 用途 物理、化学方法 （同左） 灭活的病毒 物理（离心、振动、电刺激） 化学（聚乙二醇） 诱导方法 使细胞分散后诱 导细胞融合 去除细胞壁后诱 导原生质体融合 细胞融合的方法 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性、 植物细胞全能性 原理 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 植物、动物细胞融合的比较 产量少、纯度低、特异性差 单克隆抗体 2、传统制备抗体的缺点是？如何改进 ？ 1、传统制备抗体的方法是？ 3、抗体是如何产生的？ ？ 单克隆抗体 . . 一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞能无限增殖 杂种细胞 动物细胞培养技术 设计方案： 动物细胞融合 创始人：米尔斯坦 单克隆抗体 既能产生特异性抗体，又能大量增殖 B淋巴细胞 注射特定抗原蛋白 骨髓瘤细胞 培养骨髓瘤细胞 融合 （只考虑两两融合）培养液中细胞有几种类型？融合细胞几种类型？ 骨髓瘤细胞---骨髓瘤细胞 B淋巴细胞--- B淋巴细胞 B淋巴细胞---骨髓瘤细胞 多种杂交细胞 在具有筛选作用的培养基上培养 专一抗体检验阳性 克隆上述杂交细胞 分开不同杂交细胞，克隆专一抗体 检验阳性细胞 单克隆抗体 注射到小鼠体内 体外培养 单克隆抗体的制备过程 第1次筛选目的：得到杂交瘤细胞（多种）。 第2次筛选目的：在杂交瘤细胞中筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。 该细胞继承双亲细胞的遗传特性，既能产生专一抗体又能无限增殖。 杂交瘤细胞有何特点？ 特异性强，灵敏度高 免疫小鼠 培养骨髓瘤细胞 融合 B淋巴细胞 注射特定抗原蛋白 选择培养基上培养 专一抗体检验阳性 专一抗体检验阳性 注射到小鼠体内 体外培养 单克隆抗体 克隆杂交细胞 分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞 多种杂交细胞 杂交瘤细胞有何特点？ 本过程利用的那些技术？ 动物细胞融合技术 动物细胞培养技术 是否注射抗原 （只考虑两两融合）培养液中细胞有几种类型？几种融合细胞？ 两次筛选的目的分别是什么？ 2、单克隆抗体制备过程 与传统制备的抗体相比具有什么特点？ ①诊断疾病（识别作用，如同位素标记单克隆抗体，可诊断肿瘤、心血管畸形等） 单克隆抗体的应用 优点：准确、高效、简易、快速 ②用于治疗疾病和运载药物（主要用