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FISH技术在宫颈癌检测中的应用 北京金菩嘉医疗科技有限公司 宫颈癌概述 宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤之一，发病率在女性恶性肿瘤中居第二位，仅次于乳腺癌。据世界范围统计，每年估计有46.6 万左右的宫颈癌新发病例，其中80%的病例发生在发展中国家。近几年来，据一些国家和地区报道，宫颈癌的发病和死亡大致稳定，但局部有增长的趋势，特别是宫颈癌的年轻病例增加，宫颈腺癌的发病也趋于年轻化。在我国部分地区近年也出现了宫颈癌病人年纪年轻化趋势的报道 宫颈癌的发病原因 行为危险因素 性生活过早、多个性伴侣、多孕多产、社会经济地位低下、营养不良及性混乱等 生物学因素 细菌、病毒和衣原体等各种微生物的感染 宫颈癌的发生和发展 子宫颈不典型性增生（轻-中-重） 原位癌 早期浸润癌 浸润癌 病理分型 鳞状细胞癌为主，约占95％；腺癌仅为5％左右；腺鳞癌少见，但恶性度最高，预后最差。 宫颈癌的细胞学分级 传统宫颈癌临床诊断及筛选方法 临床检测方法 传统巴氏细胞学涂片液基薄层细胞检测(TCT） HPV病毒检测 荧光原位杂交（FISH）检测 三种检测方法比较 细胞形态学 宫颈癌 TERC基因 TERC（人类染色体末端酶 ）基因定位在3q26.3 ，该基因的扩增可阻止细胞凋亡，导致肿瘤产生 宫颈细胞由非典型性发育异常向宫颈癌转变的过程中几乎都伴有3号染色体长臂扩增。其中，涉及到的最重要的基因可能是TERC基因。该基因扩增能准确区分宫颈细胞高度癌前病变与低度癌前发育异常，鉴别诊断的敏感性及特异性均在90%以上；同时，这一扩增也能预测52%－96%的癌前病变有恶变的可能 hTERC基因扩增的检测极有助于宫颈癌的筛查及早期诊断 检测这一基因扩增的标准方法即为FISH技术 FISH （Fluorescence in situ hybridization） FISH是一门新兴的分子细胞遗传学技术，是20世纪80年代末期在原有的放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性原位杂交技术。 广泛应用于动植物基因组结构研究、染色体精细结构变异分析、病毒感染分析、人类产前诊断、肿瘤遗传学和基因组进化研究待许多领域。 原理 用已知的标记单链核酸为探针，按照碱基互补的原则，与待检材料中未知的单链核酸进行异性结合，形成可被检测的杂交双链核酸。由于DNA分子在染色体上是沿着染色体纵轴呈线性排列，因而可以探针直接与染色体进行杂交从而将特定的基因在染色体上定位 FISH技术的特点 FISH探针的种类 FISH技术在宫颈癌检测中的应用 可供FISH分析的宫颈细胞样本 操作流程简图 制片质量对FISH结果的影响 宫颈细胞涂片 宫颈细胞涂片的制备 传统宫颈刮片巴氏涂片： 手工涂片 细胞分布不均匀、厚薄不一致 成分复杂 TCT样本玻片 ： TCT专门的采样器采集子宫颈细胞样本，将采集器置入装有细胞保存液的小瓶中进行漂洗，这样就获得了几乎全部的细胞样本。 患者的细胞样本瓶用全自动细胞检测仪将样本分散并过滤，以减少血液、粘液及炎症组织的残迹，这样就得到了一个薄薄的保存完好的细胞层。 宫颈细胞涂片预处理 TCT采集宫颈细胞 TCT采集宫颈细胞玻片的制备 TCT采集宫颈细胞玻片预处理 FISH实验 结果分析 临床意义 CIN2 and CIN3区分正常, ASCUS, and CIN1的灵敏度和特异性达到90% 。 预测从 CIN1/CIN2 发展到CIN3的风险 在 52%-96%，其预测灵敏度是100% ， 特异性是 70% 。 参考文献 S Andersson, K-L Wallin, A-C Hellstro, et al. Frequent gain of the human telomerase gene TERC at 3q26 in cervical adenocarcinomas. British Journal of Cancer. 2006 , 1 –8. Kerstin Heselmeyer-Haddad, Kathrin Sommerfeld, Nicole M. White, et al, Genomic Amplification of the Human Telomerase Gene (TERC) in Pap Smears Predicts the Development of Cervical Cancer. American Journal of Pathology, 2005,166, (4):1229-1238. Kerstin Heselmeyer-Haddad, Vikt