2第二章_灭活剂、保护剂及免疫佐剂.pptVIP

2)大肠杆菌不耐热毒素（LT） 大肠杆菌LT毒素有A和B两个亚单位,有一定抗 原性. A亚单位基因工程点突变体LT(R192G) ——无毒性作用，但仍保留了其佐剂效应 ——可诱导机体产生局部粘膜免疫反应。 利用基因突变技术，构建的A和B两个亚单位的表达质粒DNA联合应用，也可诱导机体产生很强的Th1细胞因子反应（IFN-γ）和Th2细胞因子反应（IL-4）。而且，LT毒素表达质粒作为佐剂，可协助DNA疫苗诱导机体产生更强的细胞免疫反应，有望成为一种新型免疫增强剂。 第三节 免疫佐剂 佐剂 常用 免疫佐剂 不溶性铝盐类佐剂 新型 免疫佐剂 油水乳剂佐剂 蜂胶佐剂 细胞因子佐剂 微生物及代谢产物佐剂 MF59佐剂 脂质体佐剂(Liposomes) 免疫刺激复合物(Iscom) 第三节 免疫佐剂 ①抗原储存库延长抗原储存时间，延长抗原释放， 加强抗原降解等； ②形成肉芽肿,促进炎症反应,增强吞噬细胞吞噬作用； ③刺激淋巴细胞增殖和转化。 三、免疫佐剂的作用机理 （不同书有不同写法） 机理非常复杂，但可概括为以上三个方面 第三节 免疫佐剂 下课吗？ 用铝粉加烧碱合成法： 2Al(OH)3+12H2O+3H2SO4→Al2(SO4)3·18H2O ??? A12(SO4)3·18H2O+6NaOH→2Al(OH)3+2Na2SO4+18H2O 用铜纱筛滤过，用布袋脱水过夜，收存于容器内，可约得600kg铝胶。 取氢氧化铝干粉50～55kg，加入6万毫升沸水中，搅拌均匀;倒入硫酸100kg，爆沸至棕褐色，经30～60min后，加温水，边加边搅拌约至总量为35万毫升；用前加水稀释至100万毫升，温度约为80℃，盛装在一个缸内 另一缸盛80kg烧碱，加水至100万毫升，加温至75℃ 两液等量逐渐流入另一耐酸搪瓷缸内，蒸汽吹沸熟化10min，调节pH 6.9土0.1，继续熟化3min，稳定pH 6.9土0.1 静置沉淀，弃上清后加入约5倍量软化水，搅拌洗涤、弃上清，如此3～5次，检查至硫酸盐合格为止。 第三节 免疫佐剂 注意事项 氢氧化铝吸附力较强，所以要用软化水或去离子水洗涤。 氢氧化铝胶为两性化合物，过酸或过碱都会失去胶态。故要 掌握好化合时的pH值。 贮存铝胶应放在耐酸搪瓷缸或耐酸池中，严密封盖，贮放期不超过3个月。 铝胶室温保存，以免破坏胶态。 第三节 免疫佐剂 2.油水乳剂佐剂 一种好的乳剂疫苗应是油包水（W/O）或水包油（O/W）型，粘度低，颗粒均匀，稳定性良好，呈乳白色。 “乳剂”是将一种溶液或干粉分散成细小的微粒,混悬于另一不相溶的液体中所成的分散体系.被分散的物质称为分散相(内相),承受分散相的液体称连续相（外相），两相间的界面活性物质称为乳化剂。 第三节 免疫佐剂 是指一类由油类物质和乳化剂按一定比例混合形成的佐剂。 该类佐剂主要在抗原寻的过程中起作用，使抗原在注射部位保持稳定，为抗原在淋巴系统中转运提供载体，增加单核细胞的形成和积聚。 油乳剂疫苗的免疫效力高低，直接与乳化作用的好坏和乳剂成分的质量等有关。 天然乳化剂：阿拉伯胶、海藻酸钠、蛋黄以及炼乳 乳化剂 第三节 免疫佐剂 人工合成乳化剂 离子型: 阴离子类乳化剂：十二烷基磺酸钠和硬脂酸铝 阳离子类乳化剂：氯化苯甲烃铵、溴化十六烷三甲基 非离子型： 月桂酸聚甘油脂、山梨醇脂和单油酸脂、司本-80、吐温-80 国内外常用白油：Drakocel-6VR、Marcol-52和Lipolul-47号或10号白油 白油 佐剂 质量标准: 无色无味，50℃运动粘度7mm2／s左右。 紫外吸收A250-350＜0.1％，紫外消光系数＜12×108； 单环芳烃与双环芳烃含量低于0.5％,无多环芳烃； 小鼠腹腔注射0.5ml或家免皮下注射2.0ml白油，观察60d，表现正常。 第三节 免疫佐剂 （1）剂在水中法： 乳剂配方与乳化方法 第三节 免疫佐剂 将乳化剂直接溶于水中，在激烈搅拌下将油加入，可直接生成O/W乳剂。若欲得W/O型，可继续加入油，直到发生变型。该法通常用匀浆器或胶体磨，高速搅拌而得到较好的乳剂。 （2）剂在油中法： 将乳化剂溶于油相，将油相直接加入水相中得O/W，如水相直接加入油相，得到W/O型，如欲得O/W，继续加入至变型。该法制成的乳剂，一般均匀颗粒直径在0.5μm左右，比较稳定。 免疫实验动物用的佐剂配制 (1)弗氏佐剂： 第三节 免疫佐剂 矿物油75%-85％，乳化剂15％-25%，混合后经除菌过滤而成为FIA；如向其中加入0.5mg／m1死结核杆菌即为FCA。使用时，将含抗原的水相，与上述任一