chap 6 微生物的生长和其控制.pptVIP

2 生理指标法 （1） DNA 测定法 这种方法是基于 DNA 与 DABA — 2HCl( 即新配制的 20 ％ W ／ W ， 3,5 —二氨基苯甲酸 - 盐酸溶液 ) 结合能显示特殊荧光反应的原理，定量测定培养物的菌悬液的荧光反应强度，求得 DNA 的含量，可以直接反映所含细胞物质的量。同时还可根据 DNA 含量计算出细菌的数量。每个细菌平均含 8.4 × 10 -5 g DNA 。 （2 ）其他生理指标测定法 用某物质的消耗量或某产物的形成量来表示微生物的生长量。例如通过测定微生物对氧的吸收、发酵糖产酸量或 CO 2 的释放量，均可用来作为生长指标。 使用这一方法时，必须注意作为生长指标的那些生理活动，应不受外界其他因素的影响或干扰，以便获得准确的结果。 获得同步生长的方法主要有两类： 环境条件诱导法：变换温度、光线、培养基等。造成与正常细胞周期不同的周期变化。 选择法：选择性过滤、梯度离心。物理方法，随机选择，不影响细胞代谢。 现象：活菌数没增加，曲线平行于横轴。 原因：适应新的环境条件，合成新的酶，积累必要的中间产物。 不同温度下的代时 对微生物生长曲线的分析 ① 微生物在对数生长期生长速率最快。 ② 营养物的消耗，代谢产物的积累，以及因此引起的培养条件的变化，是限制培养液中微生物继续快速增殖的主要原因。 ③ 用生活力旺盛的对数生长期细胞接种，可以缩短延迟期，加速进入对数生长期。 ④ 补充营养物，调节因生长而改变了环境 pH 、氧化还原电位，排除培养环境中的有害代谢产物，可延长对数生长期，提高培养液菌体浓度与有用代谢产物的产量。 ⑤ 对数生长期以菌体生长为主，稳定生长期以代谢产物合成与积累为主。根据发酵目的的不同，确定在微生物发酵的不同时期进行收获。 连续培养技术——恒化连续培养 连续培养技术——恒浊培养 连续培养技术——恒浊培养 固定化细胞连续培养 细胞固定化是通过包埋法、微胶囊法、吸附法等将细胞固定在载体的内部或表面 ，加入营养液及合适的培养条件，得到代谢产物。 优点：可提供高密度的细胞；减少细胞的流失，反复利用；简化细胞与代谢产物的分离工艺。 缺点：成本高；易污染；物质传递阻力大；只能用于细胞分泌型产物的发酵。 连续发酵 连续发酵 缺点：菌种易于退化；易于遭到杂菌污染；营养物利用率低于单批培养。 连续发酵的生产时间受以上因素限制，一般只能维持数月~ 1年。 厌氧培养是通过隔绝空气或驱除氧气的方法来实现的。实验室培养时，可将菌种接种到固体、半固体培养基的深层进行培养，同时加入还原剂；也可将厌氧微生物放入真空干燥器，抽出空气，并充入氮气或氮气和二氧化碳的混合气体。 超声波  超声波:（ 20 000 赫兹 ) 的声波，在多种领域具有广泛的应用。 适度的超声波处理微生物细胞，可促进微生物细胞代谢。强烈的超声波处理可致细胞破碎，因此，在获取细胞内含物的有关研究中，方法之一是用超声波破碎细胞。这种破碎细胞作用的机理是超声波的高频振动与细胞振动不协凋而造成细胞周围环境的局部真空，引起细胞周围压力的极大变化，这种压力变化足以使细胞破裂，而导致机体死亡。另外超声波处理会导致热的产生，热作用也是造成机体死亡的原因之一。故在超声波处理过程中，通常采用间断处理和用冰盐溶液降温的方式避免产生热失活作用。 所以几乎所有的微生物细胞都被超声波破坏，只是敏感程度有所不同。杆菌比球菌、丝状菌比非丝状菌、体积大的菌比体积小的菌更易受超声波破坏，而病毒和噬菌体较难被破坏，细菌芽孢具更强的抗性，大多数情况下不受超声波影响。 对微生物的杀伤或致死具有广谱性和在实践中常用的化学 消毒剂、杀菌剂和与微生物关系密切的化学疗剂及其抑菌或杀菌机制如下 : 1 ．氧化剂 高锰酸钾、过氧化氢、漂白粉和氟、氯、溴、碘及其化合物都是氧化剂。通过它们的强烈氧化作用可以杀死微生物。 高锰酸钾是常见的氧化消毒剂。一般以 0.1% 溶液用于皮肤、水果、饮具、器皿等消毒。但需在应用时配制。 碘具有强穿透力，能杀伤细菌、芽孢和真菌，是强杀菌剂。通常用 3% ～ 7% 的碘溶于 70% ～ 83% 的乙醇中配制成碘酊。 氯气可作为饮用水或游泳池水的消毒剂。常用 0.2 ～ 0.5μg/L 的氯气消毒。氯气在水中生成次氯酸，次氯酸分解成盐酸和初生氧。初生氧具有强氧化力，对微生物起破坏作用。 漂白粉也是常用的杀菌剂。它含次氯酸钙，在水中生成次氯酸并分解成盐酸、初生氧和氯。 初生氧和氯都能强烈氧化菌体细胞物质，以致死亡。 5% ～ 20% 次氯酸钙的粉剂或溶液常用作食品及餐具、乳酪厂