2015年高考生物总复习配套选修1 专题35 植物组织培养技术DNA和蛋白质技术.ppt

3.实验关键： (1)取材不能用哺乳动物的血细胞，原因是其成熟红细胞无 细胞核。 (2)获取 DNA 时要向鸡血细胞液中加入足量的蒸馏水，以 便使细胞膜和核膜破裂，把核内物质释放出来。 (3)实验中有 6 次搅拌，除最后一次搅拌外，前 5 次搅拌均 要朝一个方向。并且在析出 DNA、DNA 再溶解和提取 DNA 中， 各步骤搅拌都要轻缓，玻璃棒不要直插烧杯底部，防止 DNA 分子断裂。 (4)两次加蒸馏水的目的： ①第一次加蒸馏水是为了使血细胞吸水膨胀破裂(注：植物 细胞是用洗涤剂溶解细胞膜)。 ②第二次加蒸馏水是为了稀释 NaCl 溶液，析出 DNA。 (5)三个浓度的 NaCl 溶液： ①2 mol/L NaCl 溶液：为了溶解 DNA，使 DNA 与蛋白质 分离。 ②0.14 mol/L NaCl 溶液：为了析出 DNA。 ③0.015 mol/L NaCl 溶液：为了溶解 DNA。 (6)DNA 易吸附在玻璃容器上，所以实验中最好使用塑料烧 杯、试管、容器，以减少 DNA 的损失。 4.去除滤液中的杂质的其他方案： (1)方案一：用嫩肉粉(蛋白酶)，它能水解蛋白质，但对DNA 没有影响。 (2)方案二：加热至 60～75 ℃，大多数蛋白质不能忍受 60～ 75 ℃的高温而变性，但 DNA 不变性。 【典例】下列关于 DNA 粗提取与鉴定的说法正确的是 ( ) A.析出 DNA 时要缓慢地加蒸馏水，当析出黏稠物时即不再 加水 B.在探究洗涤剂对植物细胞 DNA 提取的影响实验中，自变 量是洗涤剂和食盐 C.提取的 DNA 溶解后加入二苯胺试剂即可染成蓝色 D.将含有 DNA 的滤液放在 60～75 ℃的恒温水浴箱中保温 后过滤，能去除蛋白质杂质 [解析]DNA 在 0.14 mol/L 的 NaCl 溶液中溶解度最低而析 出，方法是用蒸馏水进行稀释，直至 DNA 析出量不再增加为 止；探究洗涤剂对植物细胞 DNA 提取的影响实验中，自变量 是洗涤剂；提取的 DNA 溶解后加入二苯胺试剂后要进行加热 和分设对照组。 [答案]D 【举一反三 2】在 DNA 粗提取过程中，先后两次向烧杯中 加入蒸馏水的作用分别是( ) A.稀释血液、冲洗样品 B.使血细胞破裂、降低 NaCl 浓度使 DNA 析出 C.使血细胞破裂、增大 DNA 溶解量 D.使血细胞破裂、提取含杂质较少的 DNA [解析]第一次是使血细胞破裂；第二次是降低 NaCl 浓度使 DNA 析出。 [答案]B 三、蛋白质的提取和分离(以血红蛋白的提取和分离为例) 1.样品处理： (1)红细胞的洗涤：目的是去除杂蛋白，分离时采用低速短 时间离心，直至上清液不再呈现黄色，表明红细胞已洗涤干净。 (2)血红蛋白的释放：在蒸馏水和甲苯(溶解细胞膜)的作用 下，红细胞破裂，释放出血红蛋白。 2.粗分离： (1)分离血红蛋白溶液：将搅拌好的混合溶液离心后，将试 管中的液体用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层，于分液漏斗中静 置片刻后，分离下层的红色透明液体。 (2)透析：取 1 mL 的血红蛋白溶液装入透析袋中，将透析 袋放入盛有 300 mL、物质的量浓度为 20 mmol/L 的磷酸缓冲液 中，透析 12 h，去除样品中分子量较小的杂质。 分离的 种类 相对分 子质量 直径 大小 运动 方式 运动 速度 运动 路程 洗脱 次序 大分子 物质 大 大于凝胶 颗粒空隙 垂直向下 的运动 较快 较短 先 小分子 物质 小 小于凝胶 颗粒空隙 垂直向下、 无规则扩 散的运动 较慢 较长 后 3.纯化：利用凝胶色谱柱可对血红蛋白进行纯化。凝胶色 谱法分离蛋白质的原理，见下表： 4.纯度鉴定：使用最多的是 SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳 (可测定蛋白质的相对分子质量)。 项目 DNA 粗提取与鉴定 血红蛋白的提取与分离 材料选择 鸡血细胞等含 DNA 丰富的生物 组织 哺乳动物成熟的红细胞 破碎细 胞方式 ①动物细胞：吸水涨破 ②植物细胞：洗涤剂、食盐搅拌 研磨等 加蒸馏水和甲苯搅拌 去除杂 质方式 ①用不同浓度的 NaCl 溶液处理 ②用酒精处理 ③用蛋白酶处理等 ①透析处理 ②纯化处理 鉴定方式 二苯胺，沸水浴 SDS—聚丙烯酰胺凝胶电 泳法测定相对分子质量 DNA 与血红蛋白的提取和分离过程比较 【典例】下列关于 DNA 和血红蛋白的提取与分离实验的 叙述中，错误的是( ) A.可用蒸馏水涨破细胞的方法从猪红细胞中提取到 DNA 和蛋白质 B.用不同浓度的 NaCl 溶液反复溶解与析出 DNA 可去部分 杂质 C.透析法分离蛋白质