金黄色葡萄球菌检验课件_5.ppt

金黄色葡萄球菌检验 革兰氏阳性球菌 步骤： 检样处理 增菌 分离 血浆凝固酶试验 革兰氏染色 固体样品：25g（电子天平） 液体样品：25mL（25mL吸量管） + 225mL生理盐水（量筒），混匀。 注意： 液体样品先用无菌NaOH或HCl调节PH至7.0。 增菌 取上述混合液5mL（吸量管） 50mL7.5%氯化钠肉汤 培养（于36℃±1℃培养18~24h） 从阳性增菌液中用接种环取 平板划线示意图 血浆凝固酶试验 用长滴管将新配制的兔血浆移入灭菌小试管中； 用吸量管移取0.2~0.3mL脑心浸出液（BHI）肉汤（阳性）加入小试管； 放入36℃±1℃水浴或恒温箱，每0.5h观察一次，至少观察6h； 凝固为阳性。 用阳性表皮菌做对照试验，观察结果。（不凝固） 革兰氏染色步骤： 涂片：在载玻片中央滴一滴生理盐水，用无菌操作法挑取菌种于生理盐水中，调匀并涂成薄膜。注意：生理盐水不宜过多；涂片必须均匀。 火焰固定：载玻片通过火焰1 ~ 2 次固定，不可过热，以载玻片不烫手背为宜。 结晶紫初染：涂片置于水平位置。涂片薄膜上加结晶紫1滴，染色1min。 水洗：用自来水冲洗至冲下的水无色为止。 碘液媒染：加碘液媒染1min，然后用水冲洗至冲下的水呈无色为止。 乙醇脱色：用吸水纸将载玻片上的水吸净，用95%的乙醇滴于涂片薄膜上，滴洗至流出的乙醇不出现紫色为止，大约需要20 ~ 30s。立即用自来水冲洗乙醇约30s，用吸水纸吸干水分。 * * * * * * * 稀释瓶或具塞广口瓶 检样处理 7.5%氯化钠肉汤 1环 BP平板，划线 1环 血平板，划线 36℃±1 ℃ 18~24h 培养 血平板 BP平板 18~24h或45~48h 分离 开始处 开始处 菌落特征：金黄色，有时也为白色，大而凸起，圆形，不透明，表面光滑、湿润，周围有透明溶血圈。 菌落特征：黑色或灰色，圆形，光滑凸起，湿润，周围有一浑浊带，在其外层有一透明圈 从血平板或BP平板上挑取典型菌落，染色 从血平板或BP平板上挑取典型菌落，加入脑心浸出液（BHI）肉汤 从阳性血平板或BP平板上挑取典型菌落，营养琼脂斜面划线 于36℃±1℃培养18~24h 兔血浆配制：将小支试剂加入粉剂瓶中，摇匀即可。现配现用。 涂片—— 火焰固定——结晶紫初染—— 水洗—— 碘液媒染—— 乙醇脱色—— 水洗—— 吸干—— 番红或沙黄复染—— 水洗—— 干燥—— 镜检 番红或沙黄复染：在涂片薄膜上滴加番红1滴，染色1 ~ 2 min。 水洗：用水冲洗至冲下的水呈无色为止。 干燥：于室温下自然干燥。 观察：干燥后，于涂片薄膜上滴香柏油1滴，置油镜下观察。 结果: 革兰氏阳性菌——紫色； 革兰氏阴性菌——红色。 革兰氏染色结果： G+（紫色，葡萄球状，无芽孢，无荚膜） * * * * * * *