进出口动物源性食品中三聚氰胺快速检测方法—ELISA编制说明.DOC

《》编制说明标准制定的任务来源及意义 本标准的制定工作是由中华人民共和国国家认证认可监督管理委员会提出并归口，由出入境检验检疫局研究起草，计划编号为2008B184。 本标准制定了编制依据 本标准是经大量实验研究、评估和验证后制定的。 方法概述主要实验技术论证 酶联免疫法之所以能够方便快捷地应用在食品分析中主要是由于其不需要经过繁琐的净化步骤，从而大大缩短了时间。比较了几种常用的掩蔽剂对于消除基质影响的作用情况方法的主要技术指标 1方法检限研究建立的直接竞争ELISA检测方法g/kg，液态奶及含乳巧克力、乳清粉、酸奶等含乳食品样品经前处理及掩蔽剂稀释后的检测限g/kg，均满足目前三聚氰胺的安全限量标准（MRLs）的要求，即针对婴幼儿为1.0mg/kg和其他乳品和含乳制品为2.5mg/kg。同时本方法还使用于肉类（鸡、鱼肉）、鸡蛋和酱油。 2、方法精密度 严格，对检测进行了精密度的测试，分别以板内变异和板间变异表示。取六个不同浓度的，进行ELISA分析，每个浓度作10个复孔，测得抑制率（IC）进行分析，变异系数%。取六个不同浓度的标准溶液，进行ELISA分析，每个浓度每天作两次分析，综合5天测得的抑制率（IC）吸光度值进行分析，变异系数%。3、方法准确度 选择种不含的样品，分别添加3个不同含量水平，提取后采用直接竞争ELISA方法检测，计算样品加标回收率，以加标回收率表示检测方法的准确度。结果显示，回收率均在%之间。样品加标水平(g/kg) 平均回收率（%） 鸡蛋 1.8 100 5 84 10 88 冰激淋 2.4 104 5 102 10 98 巧克力 2.5 96 5 94 10 88 液态奶 0.06 117 0.25 120 0.5 102 酸奶 0.16 106 0.25 112 0.5 105 肉类（鸡肉） 1.25 81 2.5 92 5 90 乳糖 0.02 120 0.05 112 0.1 122 婴儿豆奶粉 0.8 124 2.5 125 5 128 婴儿奶粉 0.1 110 0.25 96 1 116 4、方法特异性 抗三聚氰胺抗体抗体由表可以看出所制备的抗体。验证样品 加标水平 (g/kg) ELISA UPLC-MS/MS 回收 回收 冰激淋 2.4 104 79.3 液态奶 0.06 117 89.4 酸奶 0.16 106 74.7 婴儿奶粉 0.1 110 79.4 应用本方法对约个样进行了的分析，随机抽取了阴性检出结果样（n=20），分析均未检出残留，准确率为100%，即假阴性为0；对阴性样（n=20）进行添加实验，添加水平为ELISA方法与液相色谱-串联质谱法进行比对分析，0.457 1.01 1.83 1.45 4.52 9.25 0.412 0.92 1.79 1.57 4.38 8.15 中国疾控中心 0.447 0.89 1.78 1.69 4.81 7.97 0.434 0.93 1.88 1.59 4.27 8.13 河北出入境检验检疫局 0.401 0.87 1.66 1.47 4.11 8.28 0.395 0.97 1.61 1.78 4.36 8.69 天津出入境检验检疫局 0.411 0.83 1.73 1.83 4.33 9.01 0.398 0.89 1.85 1.51 4.09 8.73 北京生命科学研究所 0.388 1.05 1.88 1.88 4.02 8.11 0.449 0.94 1.83 1.62 4.16 8.51 平均回收率(%) 0.42 0.93 1.78 1.64 4.31 8.48 RSD (%) 5.7 6.6 5.3 9.0 5.1 5.8 六、结论 本标准简便易行，可快速、准确地对中的残留进行筛选检验。参考文献 1