第一章--组织培养实验室和操作技术.pptVIP

Nitch培养基 (中等无机盐) 特点： 1）大量元素较少，为MS培养基的1/2 2）微量元素种类少但含量高 3）维生素含量高 ?缺铁症状：叶面呈绿色网纹状失绿。随病势发展，叶片失绿程度加重，出现整叶变为白色，叶缘枯焦，引起落叶。严重缺铁时，新梢顶端枯死。 桃树 缺铜症状： 新梢顶端叶片的叶尖失绿变黄，叶片出现褐色斑点至扩大变成深褐色，引起落叶。 枝顶端生长不良，其下部的芽开始生长，形成丛生的细枝。 菊花 缺锰典型症状： 叶脉间失绿褪色，但叶脉仍保持绿色，脉间出现坏死斑，缺素症状由幼叶开始。 菜豆 缺钼典型症状： 叶较小，叶脉间失绿,有坏死斑点，且叶边缘焦枯，向内卷曲。 十字花科植物缺钼时叶片卷曲畸形，老叶变厚且枯焦。 白菜 缺硼典型症状： 受精不良,籽粒减少 ，“花而不实”， “蕾而不花”； 根尖、茎尖的生长点停止生长，而形成簇生状； 常引起各种腐烂病。 马铃薯 3 有机营养成分 1）碳源 碳源物质包括糖类物质、醇类物质和有机 酸，以糖类物质最重要。 糖类物质特点： ◆提供能源和调节渗透压 ◆使用浓度一般在2%—5% ◆利于吸收和利用 2）维生素类 ◆以各种辅酶的形式存在 ◆参与多种代谢活动 ◆对生长，分化等有很好的促进作用 ◆主要分为脂溶性维生素和水溶性维生素 ◆常用维生素有VB1和VB6 种类：B1、B6、B12、VC、烟酸和生物素 3）肌醇 ◆环己六醇 ◆细胞壁的构建材料 ◆参与碳水化合物、磷脂代谢及离子平衡等 生理活动 ◆促进活性物质发挥作用 4） 氨基酸 ◆蛋白质的组成成分 ◆有机氮源 ◆可直接被细胞吸收利用 ◆培养基中常用的是甘氨酸 5）天然复合物 ◆促进某些愈伤组织和器官的生长 ◆化学成分不明、复杂 ◆天然营养混合物 如：水解酪蛋白、玉米胚乳、酵母提 取物 4 植物生长调节剂物质 1）生长素 ◆促进细胞伸长和分裂 ◆促进生根、抑制器官脱落、性别控制、延长休眠、顶端优势、单性结实 ◆诱导愈伤组织形成 ◆溶于95%酒精或0.1mol/L的NaOH中，后者的溶解效果更好 ◆常用的生长素： IAA(吲哆乙酸)、NAA (奈乙酸 ) 2,4-D(二氯苯氧乙酸)、IBA(吲哆丁酸) 2）细胞分裂素类 ◆促进细胞分裂和分化 ◆诱导胚状体和不定芽的形成 ◆延缓组织的衰老并增强蛋白质的合成 ◆用于离体成花的调控 ◆溶于0.5—1.0mol/L的盐酸或稀薄的NaOH中 ◆常用的细胞分裂素： KT (激动素) BA(6-卞基腺嘌呤) 2-ip(异戊烯氨基嘌呤)玉米素 3）赤霉素类和脱落酸 A、赤霉素类 ◆组织培养中不常使用 ◆加速细胞的伸长生长 ◆促进细胞的分裂 ◆主要是GA3 B、脱落酸 ◆抑制细胞分裂和伸长 ◆促进脱落和衰老 ◆促进休眠和提高抗逆能力 5. 其他添加物 1）活性炭 ◆吸附培养基及培养物分泌物中的抑制物质 ◆抑制外植体褐变 ◆防止玻璃苗的产生 ◆促进培养物生长和分化 ◆促进生根 2）抗生素 ◆防止外植体内生菌造成的污染 活性炭 6. 凝固剂 琼脂 ◆是使用最普遍的凝固剂 ◆用量一般在6—10g/L之间 ◆颜色以浅、透明度高好，洁净为上品 除了琼脂外，在组织培养中还可以使用琼脂糖、结冷胶等。 7. pH 一般情况下：5.0-6.0 常用：5.7-5.8 ◆培养基形态不同：固体培养基、液体培养基 ◆培养过程不同：初代培养基、继代培养基 ◆作用不同：诱导培养基、分化培养基 、生根 培养基 ◆营养水平不同：基本培养基、完全培养基 一、培养基的种类 第三节 培养基的配制、灭菌与保存 1、MS培养基