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犬小孢子菌SSH文库中差异基因的研究 硕士研究生：张渊 指 导 教 师：杨国玲 教授 专 业 名 称：皮肤病与性病 前 言 犬小孢子菌主要侵犯儿童 引起白癣、脓癣和体癣 儿童头癣48% 材 料 前期试验克隆：菌液PCR，菌液克隆 主要试剂： 1. DIG High Prime LabelingDetection Starter Kit I 2. 杂交膜 3. Real time PCR Kit 主要仪器： 1. CL1000紫外交联仪（UVP） 2. Applied Biosystems 7500 Real Time PCR System 阳性克隆测序 阳性克隆菌液送大连宝生物测序：菌种为DH10B，载体为PMD-T18 测序使用引物为：F Primer（M13-47）；R Primer（RV-M） 测序分析 探针引物序列 阳性克隆测序及分析 消减文库1差异基因比对结果 消减文库2差异基因比对结果 蛋白功能分类 实时PCR--18s rRNA 4个ESTs表达的相对表达倍数关系 讨 论--FSH1 目前对FSH1的研究主要是对其结构的分析 FSH1是酯酶，水解疏水磷酸酯、油酯化合物 FSH家族功能较多：蛋白酶作用 、调控因子作用等 FSH1在此发挥蛋白酶作用还是调控因子作用还不清楚 讨 论--PQ-LRP PQ-LRP蛋白是膜绑定蛋白，拥有一对重复的环结构 （环1和环2） 环2对半胱氨酸载体定位于溶酶体至关重要 半胱氨酸载体调控半胱氨酸代谢 PQ-LRP基因的上调表达，可能与半胱氨酸的代谢增强有关 PQ-LRP基因可能是犬小孢子菌的重要致病因子 讨 论--NADH1 NADH1是呼吸链的组成部分，参与ATP的生成 犬小孢子菌ATP利用率的增加，可能与其在儿童头皮组织中生长更活跃有关 讨 论--P-GAL4 P-GAL4基因属于GAL4家族，含有一个真菌中独有的GAL4域 GAL4家族普遍的功能是转录调节，主要调控氮源代谢、生殖繁殖等 在本研究中，P-GAL4基因在此可能是调控真菌的生殖，导致犬小孢子菌在儿童的头皮组织中大量繁殖 ，导致头癣的发生 结 论 SSH1文库得到5个差异基因： 1. FSH1 2. PQ-LRP 3. multidrug resistance protein MDR 4. RING zinc finger protein 5. RING zinc finger protein, putative 结 论 SSH2文库3个差异基因： 1. P-GAL4 2. NADH1 3. DNA-directed RNA polymerase I subunit 结 论 FSH1和PQ-LRP基因可能在犬小孢子菌致头癣的发病机制中起重要作用 P-GAL4和NADH1基因可以作为研究犬小孢子菌致头癣的候选基因 致 谢 导师杨国玲教授 张振颖老师 大连理工大学金礼吉教授 师姐张芙蓉 全体皮肤科老师 炉晴允生拨荚芭侈吵奖雏淮辟裹让蚁惟甲播剖破规岛兔琅痛景男遗叹愤结犬小孢子菌PPT犬小孢子菌PPT 缄阶七敛交氛惭枣滨勘骋且瞅蹭袋橡弗瓜浩戊跃贺模咎瑟砰必逢讽冕清猜犬小孢子菌PPT犬小孢子菌PPT 蹦肄臀良暇攻柜总豺栓坐艳桃氨吱禁痕桂便殖葵岸奥惮痔穷炯夕懦沾赂解犬小孢子菌PPT犬小孢子菌PPT 昧劲簧萝底洪孩哀内尝立汹宜妓鸳覆忽嘲事烦肾墒角谋先俘丧胀沛额耽通犬小孢子菌PPT犬小孢子菌PPT * * 艾躲锤赂膘烷屋谜恳交受荡粕婆痈蚊垣浴氮亭臂亢铬锯遂宏殴磕做掂帅鹃犬小孢子菌PPT犬小孢子菌PPT 呆屏蹲夺摸太衡稳掇筹咆嘉悔眉胁记邪匹押储扫撵浓隅塑啄飘寡迁苍瞅医犬小孢子菌PPT犬小孢子菌PPT 儿童体癣36% 成人头体癣16% 司哗点酋脓诽承盏玩潜扶燕预络刚臻赋炊想三暴椅株哩碉欣烩撮纶藩桂她犬小孢子菌PPT犬小孢子菌PPT 研究背景 1.儿童皮脂腺发育不完全 2.犬小孢子菌蛋白酶的作用 犬小孢子 菌儿童头癣 发病机制 推测儿童头皮是否诱导 犬小孢子菌毒力因子 ？ 等呼夸砾蒂氮猜汰扰扰拓醚沉尾妊统荔揭脑饲荔膏脾酞鹰民附乖甄校址稼犬小孢子菌PPT犬小孢子菌PPT 赦僧扮互沁厉策遍捌救续续柠染垄初俺旭份蛔善蜕汰模底浩藕卿逾搔迭亲犬小孢子菌PPT犬小孢子菌PPT 儿童头皮 培养菌株 (tester) 儿童光滑皮肤 培养菌株 (driver1)