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酶解法提取玉米须中总黄酮工艺优化 　　摘要：以乙醇溶液为提取剂，采用纤维素酶酶解的方法从玉米（Zea mays）须中提取总黄酮。设计单因素试验分析了酶用量、酶解温度、酶解时间、pH、乙醇体积分数和料液比等6个因素对玉米须中总黄酮提取率的影响，采用响应面法进一步优化总黄酮提取的工艺条件。结果表明，酶法提取玉米须中总黄酮的最佳工艺条件为每5.0 g干燥的玉米须粉末中加入3.0 g纤维素酶、酶解温度45.00 ℃、酶解时间149.1 min、pH 4.49、体积分数30%的乙醇溶液作为提取溶剂、料液比1∶20（m∶V，g/mL），此条件下玉米须总黄酮的提取率可达0.837%。 　　关键词：玉米（Zea mays）须；总黄酮；纤维素酶；响应面法 　　中图分类号：R284.2 文献标识码：A 文章编号：0439—8114（2012）19—4333—04 　　玉米须是玉米（Zea mays）干燥的花柱和柱头，也被称为玉蜀黍蕊、棒子毛等，是玉米的下脚料。中国的玉米产量居于世界领先地位，每年收获玉米的同时会产生大量的玉米须。然而目前仅有少量玉米须被用作传统的中药材，大部分被白白丢弃。玉米须在环境中长期堆放会滋生大量有害的生物，如霉菌、螨类等。对玉米须进行有效的处理，在实现生物资源有效利用的同时减少环境污染是一个亟待解决的课题。 　　医学上认为玉米须具有显著的利尿、降血糖[1]、抑菌[2]、降压、增强免疫、抗癌的功效[3]，既有明显的药用价值，又具备一定的食疗特征[4]。研究人员已经从玉米须中分离鉴定出了黄酮类、苷类、甾类、生物碱、糖类、有机酸、挥发油、微量元素和维生素等多种活性物质[5]。本试验使用酶解法提取玉米须中的总黄酮，并设计单因素试验考察了酶用量、提取温度、提取时间、pH、乙醇溶液体积分数和料液比等因素对黄酮提取率的影响，并在此基础上采用响应面法对提取工艺进行优化，以最大限度地保持黄酮的稳定性并提高黄酮的得率，为玉米须的开发利用提供一定的理论依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料与仪器 　　玉米须为常规型甜玉米花柱头，购买于华中农业大学校门口的集贸市场。选取质地均匀的玉米须，40 ℃干燥、粉碎，过60目筛，保存在阴凉干燥处。 　　主要试剂亚硝酸钠（上海青析化??技有限公司）、硝酸铝（上海新宝精细化工厂）、氢氧化钠（天津市风船化学试剂科技有限公司）、锌粉（湖南湘中化学试剂采供站）、盐酸（信阳市化学试剂厂）、乙醇（国药集团化学试剂有限公司）均为分析纯；芦丁（上海辰云化工有限公司）、纤维素酶（武汉市华顺生物技术有限公司）。 　　主要仪器有分光光度计（725型）、天平（FA1104N），上海精密仪器科学有限公司；恒温水浴锅（DF—101s型）、循环水真空泵（SHB—D型），郑州长城仪器厂；旋转蒸发仪（Zfa—84型），上海机械专机厂；植物粉碎机，北京医疗设备厂。 　　1.2 试验方法 　　1.2.1 标准曲线的绘制 配制0.1 mg/mL的芦丁标准溶液，将其分别稀释至0.016、0.032、0.048、0.064和0.080 mg/mL，在510 nm处检测其吸光度，得到芦丁溶液浓度X（mg/mL）对吸光度A510 nm（Y）的线性回归方程为Y=9.978X+0.002，相关系数为0.999 4。 　　1.2.2 单因素试验 设置单因素试验分别考察酶用量、酶解温度、酶解时间、pH、乙醇溶液体积分数和料液比对玉米须总黄酮提取率的影响。①酶用量。取5份干燥玉米须粉末5.0 g，加入体积分数75%的乙醇溶液100 mL，酶的用量分别为0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 g（酶活力单位60 U/g），pH 5.0、45 ℃酶解120 min。②酶解温度。取5份干燥玉米须粉末5.0 g，加入体积分数75%的乙醇溶液100 mL，调节体系pH为5.0，酶用量3.0 g，酶解温度分别为35、40、45、55、60 ℃，酶解时间120 min。③酶解时间。取5份干燥玉米须5.0 g，加入体积分数75%的乙醇溶液100 mL，调节体系pH为5.0，酶用量3.0 g，酶解温度45 ℃，酶解时间分别为60、90、120、150、180 min。④pH。取5份干燥玉米须5.0 g，加入体积分数75%的乙醇溶液100 mL，酶用量3.0 g，调节反应体系pH分别为3.0、4.0、4.5、5.0、5.5，45 ℃酶解150 min。⑤乙醇溶液体积分数。取5份干燥玉米须5.0 g，分别加入100 mL体积分数为10%、30%、50%、70%、90%的乙醇溶液，酶用量为3.0 g，pH 4.5、45 ℃酶解150 min。⑥料液比。取5份干燥玉米须5.0 g，按料液比1∶10、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50（m∶V，g/L，下同）加入体积分数30%的乙