黑龙江省小苹果高接衰退病调查与检测初报.docVIP

黑龙江省小苹果高接衰退病调查与检测初报 　　摘要：对黑龙江省宁安市地区主要果树栽培果园，以随机取样的方式，采用RT-PCR法检测了小苹果上主要果树病毒并明确带病类型，同时对果树发病情况进行了调查。结果表明：发病严重的果园，新梢生长量仅占正常树新梢生长量的33%～40%，病株率达40%～65%，病死树率达13%～40%。平均单果重仅占正常果的30%～50%大小。 　　关键词：宁安市；果树病毒；RT-PCR；病害调查 　　近年来人民随着生活水平的日益提高，人们对水果品质的要求也越来越高，苹果优良品种也不断推陈出新，果树生产由产量型向质量效益型的转变，果农们高接换头工作也随之全面开展。但是，与高接换头相伴而发生的高接衰退病也呈发展态势，表现为树势迅速衰退，产量明显降低，果实品质下降，发病严重的在短时期内树体死亡，造成了严重的经济损失，已成为影响果品产量和品质的主要因素之一。为此，我们于2011～2012年对宁安市江南乡高接衰退病的发生情况进行了调查，现总结如下，供同行参考。 　　1 基本情况 　　宁安市位于黑龙江省东南部，地貌特征为：七山一水二分田，有“塞北小江南”的美誉。全市有果树面积6666.67多hm2，年产水果13万t，产值亿元。其中20世纪80年代栽植的大秋、黄太平等品种目前都已老化，缺乏市场竞争力，从1995年开始栽植龙丰，凯九，金红等优良品种，并引进新苹，新帅等品种。目前龙丰已经成为主要栽培品种。 　　2 调查方法 　　2.1 田间调查及采样 　　在宁安市江南乡内选择有代表性的高接果园进行田间调查，调查内容包括：品种，砧木年龄，新枝生长量，症状表现等。参照刘晓等[1]的方法，取样时间在2011～2012年3月份，在各村连片果园中随机选取栽培管理水平高，果园清洁的幼龄或成龄果园为调查点。采样时对高接数量多，母本树龄不同，接穗来源不同的园进行详细调查。在每株树4个方向各剪取1年生枝条6根并做好标记保存于便携箱中，带回实验室后放入冰箱保存待用。并于秋天再次对主栽品种龙丰采集果实，同时进行生长量调查。 　　2.2 RT-PCR检测法 　　试验材料在中国农业大学植病系进行检测。选取果皮，用总RNA提取方法[2]进行检测。博迈德提取试剂盒，按产家操作说明书进行操作。 　　2.2.1 RNA提取。研磨样品1∶5（提取buffer）8 000 r/min，8 min，离心取上清液200μl包被PCR管，4℃过夜，再用PBST洗涤6次，每次2min。 　　2.2.2 反转录。加25μlTB（转移缓冲液）65℃水浴5 min，加互补引物（或随机引物）1μl瞬时离心，95℃水浴，冰上3 min加入5×RT buffer 6μl，室温30 min，取15μl加入到另一个PCR管，加入反转录混合液10μl（5×RT buffer2μ；l RNa-sin 0.5μ；l RTdNTPs 1.5μ；l DDW 5.5μ；l M -MLV 0.5μl），瞬时离心， 42℃水浴1～15 h，沸水浴变性3 min。 　　2.2.3 PCR扩增。 PCR温度设定，根据不同果树病毒设定，反应体系25μl[（10×RT buffer 2.5μ；l dNTPs 0.5μ；l TaqE 0.25μ；l cDNA 5μ；l引物（P1P2）0.5μl×2；ddH2O 15.75μl）]。 　　2.2.4 电泳及成像分析结果。 　　3 调查结果与分析 　　3.1 电泳及成像结果 　　此外，在河北农大检测中心分别对2年、3年、8年、10年树龄的金红和龙丰的枝条进行了检测。从调查结果来看，苹果的成龄树、幼龄树上均发现苹果病毒病。 　　从上面的图表可以看出对宁安市江南乡东安村，大塘村的几个主要果园田间采样调查，发现一些危害较重的主要小果树病毒ASSVd、ACLSV都被检测或发现在主栽品种当中[3]。在主栽品种龙丰，金红上苹果褪绿叶斑病毒，苹果锈果类病毒等普遍发生，部分果园里苹果花叶病毒病严重。同时发现病毒病发生的苹果园树势生长衰弱、病虫害发病严重，一般产量比较低，优质果率明显少。 　　3.2 病害情况调查 　　通过表3调查还得出龙丰嫁接在金红、凯九、黄太平上，黄太平表现出来的性状最好，最不容易发病。同样的根系，发病率金红明显高于凯九。以中间砧为4年生凯九嫁接的龙丰为例，头2年长势良好，新梢平均长70～80cm。嫁接后第3年开始表现衰退现象，新梢生长量仅占正常树新梢生长量的33%～40%，叶片发黄，发硬，枝条抽生弱，好的50～60cm，差的30～40cm。嫁接后第3年果个开始变小，严重的果个直径只有3cm 左右，平均单果重仅占正常果的30%～50%。根系，刚开始毛细根全部死亡，以后主根开始腐烂。到嫁接的第4年，侧根全部死亡。嫁接8年后，发病严重的果园无新梢，病株率达40%～6