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1、转化:受体菌直接由外界环境中摄取供体菌游离DNA,整合于自身的基因组中,因而获得该供体菌的遗传信息的过程。 研究对象:Streptococcus pneumoniae(肺炎双球菌) S型菌株:有致病性,菌落表面光滑,有荚膜 R型菌株:无致病性,菌落表面粗糙,无荚膜 1928年,Griffith进行了以下几组实验: (1)动物实验 对小鼠注射活R菌或死S菌 ————小鼠存活 对小鼠注射活S菌————————小鼠死亡 对小鼠注射活R菌和热死S菌 ———小鼠死亡 抽取心血分离活的S菌 (2)细菌培养实验 热死S菌—————不生长 活R 菌—————长出R菌 热死S菌+活R 菌—————长出大量R菌和10-6S菌 ①加S菌DNA ②加S菌DNA及DNA酶以 外的酶 ③加S菌的DNA和DNA酶 ④加S菌的RNA ⑤加S菌的蛋白质 ⑥加S菌的荚膜多糖 接合 第四节 人工获得变异品系的方法 一、筛选:采用一定的方法筛选出天然的强毒或弱毒株 二、人工诱变 1.物理因素:温度,紫外线,激光,α射线 2.化学因素:5-溴(氟)尿嘧啶,2-氨基嘌呤,可 渗入到DNA中,从而使DNA的碱基对发生置换。 3.生物因素:噬菌体、实验动物。 三、基因工程的方法 1 .目的基因的分离; 2 .目的基因与载体DNA的体外重组; 3 .重组载体导入受体细胞; 4 .外源基因的复制与表达; 5 .表达产物的检测。 * * 第六章 细菌的遗传与变异 一、几个概念 1、遗传 生物的上一代将自己的遗传因子传递给下一代的行为或功能,具有极其稳定的特性。 2、遗传型 某一生物所含有的遗传信息即DNA中正确的核苷酸序列。生物体通过这个核苷酸序列控制蛋白质或RNA的合成,一旦功能性蛋白合成,可调控基因表达。 3、表型 某一生物体所具有的一切外表特征及内在特性的总和,是遗传型在合适环境条件下的具体体现。是一种现实性。 4、变异 是生物体在某种外因或内因作用下引起的遗传物质结构改变,亦即遗传型的改变。 特点:几率极低(一般为10-5~10-6);性状变化幅度大;变化后的新性状是稳定的、可遗传的。 第一节 微生物遗传的物质基础 一、基因组和质粒 (一)基因组 细菌的基因组位于核体,是遗传的主要物质基础。核体又称染色体,是由双条环状双螺旋DNA长链组成的,含有的遗传基因,控制着细菌的遗传与变异。 (二)质 粒 质粒是细菌染色体外的遗传物质,多为环状双螺旋DNA分子。质粒可以自身复制,随宿主菌分裂传到子代菌体。在一定条件下,质粒可以转移,也可丢失。质粒是自行复制单位,有的需与核质染色体的复制同步,称为严紧型复制。 质粒示意图 细菌的质粒 二、转座因子和毒力岛 (一)转座因子 近年来发现微生物的某些DNA片段作为一个独立单位可以在染色体上移动,此种移动甚至发生在不同种细菌之间。这种可移动的DNA片段称之为转座因子。细菌的转座因子有三种类型:插入序列、转座子以及某些特殊的噬菌体。 (二)毒力岛 毒力岛是20世纪90年代提出的一个新概念。毒力岛是指病原菌的某个或某些毒力基因群,分子结构与功能有别于细菌染色体,但位于细菌染色体之内,因此称之为“岛”。 第二节 微生物的主要变异 一、形态与结构的变异 (一)形态变异 自然形成或诱导产生的L型细菌,老龄培养物中出现的衰老型,都属于形态变异。在特定组织器官中发生形态的改变,如炭疽在猪咽部不呈竹节状而呈弯曲且粗细不均匀;猪丹毒在慢性病猪心脏内不呈杆菌而为长丝状。 菌落变异 R菌落 S菌落 (二)、荚膜变异: 有荚膜细菌在特定条件下丧失形成荚膜的能力。炭疽杆菌在营养丰富且CO2达10%~20%培养条件下,产生荚膜,在普通培养基中不产生荚膜。无毒炭疽芽胞菌的弱毒株失去成形荚 膜能力。 (三)、芽胞变异 强毒疽炭杆菌——在42.5℃高温下培养——毒力变弱,且失去形成芽孢能力。 (四)、鞭毛变异:环境条件的改变而使细菌失去形成鞭毛的能力。也叫H→O变异。 在普通琼脂上生长——有鞭毛且呈弥漫 性薄膜状生称H型细菌 变形杆菌 在0.1%碳酸琼脂中生长——不形成鞭毛 而生成局限性孤立菌落叫O型细菌 二、培养特性变异 (一)光滑型→粗糙型变异 S型(smooth)菌落:光滑,湿润,边缘整齐。 R型(rough)菌落:菌落表面粗糙,枯干,边缘不整齐。 一般来说,S→R毒力由强变弱,但炭疽杆菌,结核分支杆菌,正常菌落为R型→S型,毒力减弱 (二)D菌
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