dna的粗提取与鉴定课件人教版选修一.pptVIP

* ①理解 DNA 粗提取各个步骤 的原理和目的 ②PCR 技术的原理 ③体内 DNA 复制与 PCR 技术 的区别 ④电泳法分离蛋白质的基本原 理 ①DNA 的粗提取以及鉴定的原 理及步骤 ②PCR 技术的基本操作和应用 ③蛋白质的提取和分离的基本 过程 ④用电泳法分离蛋白质的基本 操作 专题难点 专题重点 专题 5 DNA 和蛋白质技术 课题 1 DNA 的粗提取与鉴定 DNA 的提取原理 溶解度 耐受性 DNA 与杂质的________不同，DNA 与杂质对酶、高温、 洗涤剂的________不同。 DNA 粗提取的实验设计 (1)材料的选取：选用 DNA 含量相对____________的生 物组织，如鸡血、菜花、洋葱等。 NaCl 溶液 NaCl 溶液 (2) 破碎细 胞( 以鸡血 为例 ) ：鸡血 细胞，加蒸 馏水，用 ________搅拌，用________过滤，收集滤液。 玻璃棒 纱布 (3)去除杂质：利用 DNA 在不同浓度的__________中溶解度 不同，通过控制__________的浓度去除杂质。 (4)DNA 的析出：将处理后溶液过滤，加入与滤液体积相等 的、冷却的________(体积分数为 95%)。 酒精溶液 较高 DNA 的鉴定 二苯胺试剂 蓝色 DNA 溶 解 在 2 mol/L 的 NaCl 溶 液 中 ， 加 入 4 mL 的 _______________，沸水中加热 5 min，溶液变成_________。 DNA 提取材料和实验用具的选择 1．实验材料的选择原则是选用 DNA 含量高的生物组织。 有些材料不宜选用，如哺乳动物成熟红细胞(猪、牛、羊的血细 胞)无细胞核，无法提取 DNA。实验一般选用鸡血或菜花作为 实验材料。 2．鸡血细胞破碎以后释放出的 DNA，容易被玻璃容器吸 附，由于细胞内 DNA 的含量本来就比较少，再被玻璃容器吸 附去一部分，提取到的 DNA 就会更少。因此，实验过程中最 好使用塑料的烧杯和试管，这样可以减少提取过程中 DNA 的 损失。 在沸水浴条件下 DNA 遇二苯胺呈蓝色 4.鉴定的原理 酒精可以溶解蛋白质等杂质，而 DNA 不溶于酒精；60～80 ℃可以使蛋白质 变性，而 DNA 在 80 ℃以上才会变性；利用蛋白水解酶的专一性可以水解蛋白质 3.提纯 DNA 的原理 DNA 在 0.14 mol/L 的 NaCl 溶液中溶解 度最小 2.用不同浓度的 NaCl 溶液提取 DNA 的原理 动物细胞吸水涨破 1.细胞破碎的原理 实验操作原理 DNA 的粗提取与鉴定实验中涉及的原理 ⑦ — 7.过滤含 DNA 的 NaCl 溶液 ⑥ 2 mol/L 的 NaCl 溶液 20 mL 6.将 DNA 的黏稠物再溶解 ⑤ — 5.滤取含 DNA 的黏稠物 ④ 蒸馏水 4.析出含 DNA 的黏稠物 ③ 2 mol 的 NaCl 溶液 40 mL 3.溶解细胞核内的 DNA ② 20 mL 蒸馏水 2.提取鸡血细胞的细胞核 物质 ① 柠檬酸钠溶液 1.制备鸡血细胞 目的 加入物质 方法步骤 实验步骤分析 ⑨ A：1)向试管中加入 0.015 mol/L 的 NaCl 溶液 5 mL 2)加入 DNA 3)加入 4 mL 二苯胺试剂 B：1)向试管中加入 0.015 mol/L 的 NaCl 溶液 5 mL 2)加入 4 mL 二苯胺试剂 9.DNA 的鉴定 ⑧ 冷却的 95%的酒精 50 mL 8.提取含有杂质较少 的 DNA 目的 加入物质 方法步骤 续表： 目的(①～⑨)：①防止血凝。②加速血细胞破裂。③溶解 DNA。④使 2 mol/L 的 NaCl 溶液稀释至 0.14 mol/L，促使 DNA 最大限度地析出。⑤使含 DNA 的黏稠物被留在纱布上。⑥使 含 DNA 的黏稠物尽可能多地溶于溶液中。⑦除去含 DNA 的滤 液中的杂质。⑧提取 DNA。⑨鉴定 DNA 的存在。A：出现蓝 色；B：无变化。 提取 DNA 的原材料 【例 1】做 DNA 提取与鉴定实验时，用鸡血而不用猪血的 原因是( ) A．鸡血的价格低 B．猪的红细胞没有细胞核，不易提取 DNA C．鸡血不凝固，猪血容易凝固 D．用鸡血提取 DNA 更简便 【名师点拨】：DNA 提取实验材料选取的原则是 DNA 含量 高，便于提取。猪为哺乳动物，成熟的红细胞没有细胞核，不 含 DNA。 【答案】：B 【配对练习 1】能作为提取 DNA 的最佳材料的是( ) A．鸡的全血 C．鸽子的血细胞液 B．老鼠的红细胞 D．菠菜绿叶 解析：鸡的全血，血浆太多，应该除去血浆；老鼠作为哺 乳动物，