乌司他丁对脓毒症致急性肾损伤大鼠肾脏病理及尿相关指标影响.docVIP

乌司他丁对脓毒症致急性肾损伤大鼠肾脏病理及尿相关指标影响 　　[摘要] 目的 探讨乌司他丁对盲肠结扎穿孔术（CLP）所致大鼠脓毒症急性肾损伤肾脏病理及尿相关指标的影响。 方法 SD健康雄性大鼠55只，按随机化原则分成3组：正常对照组5只、模型组25只、乌司他丁治疗组25只，后两组再随机分为5个时间点（1、6、12、24、48 h），每组每时间点各5只，采用CLP复制脓毒症模型，乌司他丁治疗组造模后立即给予乌司他丁100 000 U/kg，尾静脉注射，分别在各个时间点采血、留尿标本，处死大鼠摘取肾脏，进行肾功能血肌酐（SCr）、尿素氮（BUN），尿肾损伤分子（KIM-1）、白细胞介素-18（IL-18）和中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）检测分析，光镜下观察肾脏病理变化。 结果 模型组SCr、BUN的浓度CLP术后6 h开始升高，24 h达高峰，48 h开始下降，均显著高于对照组（P 　　[关键词] 乌司他丁；脓毒症；急性肾损伤；肾脏病理 　　[中图分类号] R692 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2014）02（c）-0011-04 　　脓毒症并发急性肾损伤的发病率为19%～23%，当脓毒症并发急性肾损伤时，不仅给有效干预手段带来困难，增加患者死亡率，而且耗费巨大的医疗资源和巨额医疗费用，因此，及早防治脓毒症并发急性肾损伤，保护肾功能意义重大[1]。乌司他丁是从尿中分离纯化出来的一种糖蛋白，具有稳定细胞膜及细胞亚膜、稳定溶酶体膜抑制溶酶体释放、清除自由基、抑制炎症介质释放、改善微循环衰竭状态、抑制蛋白质分解代谢亢进等作用，并对多脏器损伤有保护作用[2-4]。本研究通过盲肠结扎穿孔术[5]（cecal ligation and puncture，CLP）建立脓毒症大鼠急性肾损伤模型，观察乌司他丁对脓毒症所致急性肾损伤的肾脏病理及尿指标变化，探讨乌司他丁对肾脏的保护作用及其机制，为临床应用提供理论依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料和仪器 　　乌司他丁（广东天普生物化学制药公司）；肾损伤分子1（KIM-1）、ELISA试剂盒（美国RD公司），白细胞介素18（IL-18）、ELISA试剂盒（武汉博士德公司），中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）、ELISA试剂盒（上海蓝基生物有限公司）。 　　1.2 实验动物和分组 　　SD健康??性大鼠55只，体质量200～250 g，适应性喂养1周，实验大鼠按随机化原则分成3组。①正常对照组（n=5）：尾静脉推注生理盐水2 ml；②模型组（n=25）：行CLP；③乌司他丁治疗组（n=25）：行CLP后即刻尾静脉注射乌司他丁100 000 U/kg。模型组、乌司他丁治疗组，再随机分为5个时间点（1、6、12、24、48 h），每组每时间点各5只，术后均补充生理盐水3 ml/100 g抗休克。 　　1.3 动物模型制备 　　实验前禁食12 h，手术组采用经典的CLP复制脓毒症急性肾损伤模型，即用10%水合氯醛0.3 ml/100 g腹腔麻醉，无菌条件下沿腹中线切开长约2 cm，分离、结扎盲肠，在盲端肠壁用12号针穿刺2次，留置1条长1 cm宽2 mm、两头贯穿盲肠的橡皮片，挤出少许粪便，将盲肠还纳腹腔，逐层缝合腹壁，编号，清醒后转入代谢笼内自由进水、进食。术毕补充生理盐水3 ml/100 g，术后自由饮食（水）。 　　1.4 留取标本 　　从术后腹壁缝合结束开始计时，分别于1、6、12、24、48 h取材，下腔静脉抽血5 ml，离心（3000 r/min）15 min，取血清于-20℃保存，待测血肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）；膀胱分离，膀胱穿刺收集尿标本于-20℃保存，待测KIM-1、IL-18、NGAL；后放血处死大鼠，取左肾切开置于10%多聚甲醛中固定，石蜡包埋，HE染色，光镜下×200下取3个视野观察肾脏病理变化。 　　1.5 指标检测 　　采用生化分析仪测定SCr、BUN。尿液标本均采用ELISA法检测KIM-1、IL-18和NGAL。 　　1.6 统计学处理 　　采用SPSS 17.0对数据进行分析，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，应用独立样本t检验，两两比较用SNK-q检验，以P 　　2.3 两组大鼠尿KIM-1、NGAL、IL-18含量的变化 　　CLP术后两组大鼠尿KIM-1、NGAL、IL-18均于1 h开始明显升高，12 h达高峰，24、48 h下降，均显著高于对照组（P 　　[2] 刘娇，陈德昌，周青山.乌司他丁对脓毒症急性肾损伤大鼠肾脏NOD1受体和血IL-18水平的影响[J].临床外科杂志，2013，21（9）：691-693. 　　[3] 王虹，刘贵建，刘锦丽，等.乌司他