分泌型卷曲相关蛋白1与慢性牙周炎相关分析.docVIP

分泌型卷曲相关蛋白1与慢性牙周炎相关分析 　　[摘要] 目的 检测分泌型卷曲相关蛋白1（SFRP1）在慢性牙周炎（CP）患者和牙周健康者的表达情况，探讨SFRP1在CP的发生与发展过程中的作用。方法 选择CP患者28例为试验组，按临床附着丧失（CAL）程度分为轻、中、重度3组，另外选择牙周健康者10例为对照组。收集两组研究对象的龈沟液，采用酶联免疫吸附法测定龈沟液中SFRP1的质量浓度。取试验组中22例CP患者的病变牙龈组织标本，以及10例对照组的正常牙龈组织，进行SFRP1免疫组织化学染色，观察着色强度，分析SFRP1表达与不同程度CP的相关性。结果 1）试验组和对照组龈沟液中SFRP1的质量浓度分别为（281.07±33.37）和（245.30±35.69）ng·L-1，试验组明显高于对照组（P0.05）。结论 SFRP1在CP患者龈沟液及牙龈组织中的表达高于牙周健康者，SFRP1可能参与了CP的发生发展过程。 　　[关键词] 慢性牙周炎； 龈沟液； 分泌型卷曲相关蛋白1 　　[中图分类号] R 783.5 [文献标志码] A [doi] 10.7518/hxkq.2013.06.017 　　分泌型卷曲相关蛋白1（secreted frizzled-related protein 1，SFRP1）是一种分泌型糖蛋白，是Wnt信号通路的重要拮抗剂。Wnt信号通路能影响人牙周膜成纤维细胞（periodontal ligament cells，PDLCs）的成骨分化调节骨生成和改建[1-2]，由此推测，SFRP1与慢性牙周炎（chronic periodontitis，CP）可能存在密切关系。本研究通过检测CP患者龈沟液中SFRP1的水平及病变牙龈组织中SFRP1的表达，探讨SFRP1在CP发生中的作用。 　　1 材料和方法 　　1.1 主要材料与研究对象 　　SFRP1酶联免疫分析试剂盒（RD公司，美国），SFRP1兔抗人、鼠多克隆抗体（Abcam公司，美国），通用型Streptavidin-HRP试剂盒、免疫组织化学DAB显色剂（北京康为世纪生物科技有限公司）。 　　实验对象均取自2011年3—12月在中南大学湘雅医院口腔科就诊的患者，选择CP患者28例为试验组，牙周健康者10例为对照组。CP患者按照临床附着丧失（clinical attachment loss，CAL）分为3度：轻度CP患者9例，CAL为1～2 mm；中度CP患者10例，CAL为3～4 mm；重度CP患者9例，CAL≥5 mm。试验组与对照组年龄、性别均匹配。所有研究对象均了解本次研究目的，同意参与并配合试验，全身健康状况良好，并符合以下要求：1）无糖尿病、心血管疾病、类风湿疾病等全身系统性疾病，无其他系统感染；2）近半年内未接受过牙周治疗，近3个月内未服用过抗生素、免疫抑制剂等药物；3）女性未处于妊娠期、哺乳期、月经期；4）咬合关系正常，无正畸治疗史；5）无长期吸烟和酗酒史。 　　1.2 试验方法 　　1.2.1 SFRP1在龈沟液中的质量浓度 用专用标准滤纸条采集研究对象的龈沟液。采集部位为右下颌第一磨牙的龈沟或牙周袋内6个位点（颊侧远中、颊侧中央、颊侧近中，舌侧远中、舌侧中央、舌侧近中）。检测所有研究对象的牙周临床指标，包括牙周探诊深度（probing depth，PD）、CAL、龈沟出血指数（bleeding index，BI）。采用酶联免疫吸附法测定龈沟液中SFRP1的质量浓度。 　　1.2.2 SFRP1在牙周组织中的表达 手术中取22例CP患者的病变牙龈组织（轻、中、重度CP组分别为7、7、8例），10例对照组取手术切取的正常牙龈组织，固定包埋，切片，按照标准二步法进行SFRP1免疫组织化学染色，显微镜下观察并照相。SFRP1在牙龈组织中的表达使用着色强度积分进行评价[3]，以有棕黄色颗粒状沉淀为阳性细胞，着色范围以阳性细胞记分。阳性细胞所占比例≤1%记为0分，2%～ 　　20%为1分，21%～50%为2分，≥50%为3分；着色程度依据深浅记分，无着色为0分，浅着色为1分，深着色为2分。上述两项分值相加为着色强度积分值：≤1.9分为阴性（-），2～2.9分为弱阳性（+），3～3.9分为阳性（++），≥4分为强阳性（+++）。 　　1.3 统计学分析 　　使用SPSS 19.0统计软件进行统计学分析。采用方差分析和LSD法分析各组龈沟液内SFRP1的质量浓度；Spearman相关分析法分析龈沟液内SFRP1质量浓度与CAL的关系；采用独立样本t检验、方差分析、Tukey分析法分析各组牙龈组织中SFRP1的表达。 　　2 结果 　　2.1 SFRP1在龈沟液中的质量浓度 　　2.1.1 CP组与对照组龈沟液中S