饲料学课件实验三、 饲料粗蛋白质测定.pptVIP

实验三、(1)饲料粗蛋白质测定(消化) 一、原 理 二、主要仪器 三、测定步骤 1. 试样的消化： 1)准确称取试样0.5-1g(含N 5-80mg)，无损地放入凯氏烧瓶或消煮管中； 2)加入硫酸铜0.9g，无水硫酸钠15g，并与试样混合均匀；加入浓硫酸25ml(勿混摇)； 3)在消煮炉上先用小火小心加热(约180℃)，待样品焦化、泡沫消失后，再加强火力360-410℃消化，直至溶液变澄清(天蓝色)后，再继续加热消化1.5hr-2hr； 4)试样分解液制备：待试样消煮液稍冷却，慢慢加入蒸馏水25-30ml、混匀，无损地转移至200或250ml容量瓶中、混匀(勿倒置混)； 5) 待试样液冷却后，加蒸馏水至容量瓶刻度，充分混匀，即为试样分解液。 实验四、饲料粗蛋白质测定(蒸馏) 1. 凯氏蒸馏仪安装、调试：气密性检查、清洗；蒸汽发生瓶的蒸馏水中应加入甲基红指示剂数滴和硫酸数滴，并保持此液为红色； 2. 取2%硼酸溶液20ml放入三角烧瓶，加入混合指示剂1滴(显淡紫红色)，接至蒸馏仪的冷凝管末端，并打开蒸气旁路开关； 3. 准确吸取试样分解液10~20ml(视含N量而定)，加入蒸馏仪反应室中，并用少量蒸馏水冲洗加样口； 4. 先关闭加样口，加入饱和NaOH溶液5~10ml；小心打开加样口使之流入反应室中，立即关闭加样口，再用少量蒸馏水冲洗加样口；关好加样口防止漏气； 5. 通入蒸气蒸馏，此时反应室液体应呈棕褐色(否则需补加碱液)；待硼酸溶液变蓝后再继续蒸馏4~5min，然后使冷凝管末端离开液面，再蒸馏1min，并用少量蒸馏水冲洗冷凝管末端。 6. 蒸馏结束，排净反应废液，洗净蒸馏室，开始新的蒸馏过程。 7. 滴 定：蒸馏后的硼酸吸收液立即用0.01M盐酸标准溶液进行滴定，当溶液由蓝色变为灰白色或灰红色时即为滴定终点。 8. 结果计算： * RCHCOOH NH2 + H2SO4 (NH4)2SO4 +SO2↑+CO2↑+H2O 无水Na2SO4 CuSO4 ? ? (NH4)2SO4+ NaOH(饱和) NH3↑+ Na2SO4+ H2O NH3↑+ H3BO3 (NH4)2B4O7 (NH4)2B4O7 + HCl (标准) NH4Cl + H3BO3 指示剂 蓝 色 灰白或灰红色 凯氏微量定氮蒸馏仪 凯氏半微量定氮蒸馏仪(改良式) 粗蛋白质(%) = ×100 W×V’/V (V2－V1 )×N×0.014×6.25