《鼠单抗的改造》ppt课件.pptVIP

* V区的人源化 嵌合抗体不能完全解决抗原性问题 V区的人源化—将鼠抗CDR移植到人抗V区中的FR区。 构建策略 CDR移植抗体 最为普遍 CDR序列组成及构象分析,确定策略 人源FR模板的重构 * V区的人源化 构建策略 CDR移植的人源化抗体 移植策略 完全CDR移植 将鼠抗全部6个CDR，克隆到人抗相应FR区上 * V区的人源化 构建策略 CDR移植的人源化抗体 移植策略 部分CDR移植 外源性CDR仍具潜在抗原性 研究表明，轻链的CDR1,CDR2和重链CDR3是维持抗原结合所必需。 将必需CDR移植到人抗FR上，得到人源化抗体 * V区的人源化 构建策略 CDR移植的人源化抗体 移植策略 SDR转移 研究发现，CDR中的只有特定区域（SDR）参与了表位的识别和结合。 SDR包括暴露在外与表位结合的残基，维持V区构象的残基。 将SDR移植到人抗相应位置上，得到人源化抗体 * V区的人源化 构建策略 CDR移植的人源化抗体 人源FR模板的重构 原则：鼠CDR能正确折叠，保持原来构象 包括：从同源抗体或抗体共同序列中选择人源FR；根据已知信息，确定FR中起关键作用的氨基酸 * V区的人源化 构建策略 CDR移植的人源化抗体 人源FR模板的重构 鼠源FR替换模板的选择 采用统一的人源FR作为替换模板：一般选择人抗最常见的VHIII和VκI的框架区作替换模板。 好处：模板信息明确，避免盲目 不足：不易保持鼠抗CDR的天然构象，可能降低或丧失亲和力。 * V区的人源化 构建策略 CDR移植的人源化抗体 人源FR模板的重构 鼠源FR替换模板的选择 在抗体序列库中搜寻与鼠抗FR最大同源性的人源FR作为替换模板 好处：减少需要更改的氨基酸数目，更好保持CDR需要的空间环境。 * V区的人源化 构建策略 CDR移植的人源化抗体 人源FR模板的重构 人FR模板的残基变换 FR残基对表位结合也有影响 FR为CDR形成正确构象提供平台 因此，在替换时尽量保留与CDR有相互作用，或与抗体亲和力密切相关，或对FR空间结构起关键作用的残基。 * V区的人源化 构建策略 CDR移植的人源化抗体 人源FR模板的重构 人FR模板的残基变换 如何确定这些残基？ 规范结构法、分子模拟，随即突变，序列分析，抗体库技术等，需晶体数据和三维结构分析数据。 * V区的人源化 构建策略 鼠抗V区的表面重塑 对鼠CDR及FR表面残基进行修饰或重塑，使其类似于人抗CDR轮廓或人FR式样。 前提：鼠抗V区抗原性源于表面残基 研究表明，表面残基携带绝大部分表位。表面形式的差异是人鼠抗体间的主要差别。 将鼠源性残基替换成人源的，模拟人抗的表面轮廓，逃避人免疫攻击。 * V区的人源化 构建策略 鼠抗V区的表面重塑 对鼠CDR及FR表面残基进行修饰或重塑，使其类似于人抗CDR轮廓或人FR式样。 好处：改变的残基少，可减少CDR与FR间的不相容性。 正在完善之中 争论热点：鼠抗引起的人抗鼠抗体反应是由表面残基还是由内部残基引起？ * V区的人源化 构建策略 表位导向的人源化抗体 利用表位导向选择进行鼠抗人源化 要点：首先保留鼠抗H或L链； 特定抗原体外筛选它与人抗L或H链组合成的杂合抗体，找出维持其活性的人抗L或H链； 利用筛出的人抗L或H链，再筛出人抗H或L链，二者组合成完全人源抗体。 基础：建立完整的人抗体库 正在探索，前景广阔 * V区的人源化 技术方案 鼠抗V区基因的获得 PCR法筛选阳性克隆 设计 鼠抗氨基酸序列分析：判断CDR区，特殊FR残基，糖基化位点，其它重要残基 * V区的人源化 技术方案 设计 鼠抗氨基酸序列分析 鼠抗V区空间结构的模拟 人抗FR区序列的选择： 固定或同源匹配的FR区 L/H FR来源相同还是不同 选择人亚群一致还是特殊FR 确定选择人FR方案 抗体亚类的考虑 * V区的人源化 技术方案 设计 鼠抗氨基酸序列分析 鼠抗V区空间结构的模拟 人抗FR区序列的选择 鉴别所选FR中公认的比较重要的回复突变 供体和受体序列分析 重新确认FR序列的选择并设计人源化抗体序列 * 小分子抗体 克隆鼠抗V区基因，连接而成的抗体 * 小分子抗体 克隆鼠抗V区基因，连接而成的抗体 单链抗体Single Chain Fv ScFv 由抗体VH、VL