畜牧课件14 免疫血清学技术.ppt

第十四章 免疫血清学技术 岳 华 第一节 概述 凝聚性反应 (包括凝集试验和沉淀试验) 标记抗体技术 (包括荧光抗体、酶标抗体、放射性标记抗体、发光标记抗体技术等)。 有补体参与的反应 (补体结合试验、免疫粘附血凝试验等)。 中和反应 (病毒中和试验、毒素中和试验)等。 免疫复合物散射反应 (激光散射免疫技术) 电免疫反应 (免疫传感器技术) 免疫转印(Western Blotting)等新技术。 第二节 凝聚性试验 抗原与相应抗体结合形成复合物，在有电解质存在下，复合物相互凝聚形成肉眼可见的凝聚小块或沉淀物，根据是否产生凝聚现象来判定相应抗体或抗原，称为凝聚性试验。是最简单的一类血清学试验。根据参与反应的抗原性质不同，分为由颗粒性抗原参与的凝集试验和由可溶性抗原参与的沉淀试验二大类。 一、凝 集 试 验 细菌、红细胞等颗粒性抗原，或吸附在胶乳、白陶土、离子交换树脂和红细胞的抗原，与相立抗体结合，在有适当电解质存在下，经过一定时间，形成肉眼可见的凝集团块，称为凝集试验（agglutination test)。 参与凝集试验的抗体主要为IgG、lgM,又称为凝集素。凝集试验可用于检测抗原或抗体，最突出的优点是操作简便，深受基层工作欢迎。 凝集试验可根据抗原的性质、反应的方式分为直接凝集试验 (简称凝集试验)和间接凝集试验。 颗粒性抗原与凝集素直接结合并出现凝集现象的试验称作直接凝集试验（direct agglutination test)。 1、玻片法 为一种定性试验。 将含有已知抗体的诊断血清 (适当稀释)与待检菌悬液各一滴在玻片上混合，数分钟后，如出现颗粒状或絮状凝集，即为阳性反应。此法简便快速，适用于新分得细菌的鉴定或分型。如沙门氏菌的鉴定、血型的鉴定等多采用此法。 也可用已知的诊断抗原悬液，检测待检血清中是否存在相应抗体，如布氏杆菌的玻板凝集反应和鸡白痢全血平板凝集试验。 2、试管法 为一种定量试验，用已知抗原以检测待测血清中是否存在相应抗体和测定该抗体的含量，以协助临床诊断或供流行病学调查。 将待检血清用生理盐水作倍比稀释，然后加入等量抗原，置37℃水浴数小时观察。视不同凝集程度记录为十十十十 (100%凝集)、十十十 (75%凝集)、十十 (50%凝集)、十（25%凝集)和- (不凝集)。以其“十十”以上的血清最大稀释度为该血清的凝集价 (或称滴度)。 （二）间接凝集试验 将可溶性抗原 (或抗体)先吸附于一种与免疫无关的、一定大小的不溶性颗粒 (统称为载体颗粒)的表面，然后与相应抗体 (或抗原)作用，在有电解质存在的适宜条件下，所出现的特异性凝集反应称为间接凝集反应。 间接凝集反应由于载体颗粒增大了可溶性抗原的反应面积，因此当颗粒上的抗原与微量抗体结合后，就足以出现肉眼可见的凝集反应。间接凝集反应的优点是敏感性高，它一般要比直接凝集反应敏感2～8倍。但特异性较差。 常用的载体有红细胞 (“O”型人红细胞，羊红细胞)、聚苯乙烯胶乳颗粒，其次为白陶土、离子交换树脂、火棉胶等。 抗原多为可溶性蛋白质如细菌、立克次体及病毒的可溶性抗原、或原虫、吸虫、丝虫的浸出液、或动物的可溶性物质、或激素及各种组织器官浸出液、域植物性蛋白质如花粉浸出液等;某些细菌的可溶性多糖也可吸附于载体上。 当载体吸附了可溶性抗原后即称为致敏颗粒。 亦称被动血凝试验 (PHA)，是将可溶性抗原致敏于红细胞表面，用以检测相应抗体，在与相应抗体反应时出现肉眼可见凝集。 2、反向间接血凝试验： 如将抗体致敏于红细胞表面，用以检测检样中相应抗原，致敏红细胞在与相应抗原反应时发生凝集，称为反向间接血凝试验 (reverse passive heamagglutination assay，RPHA)。 3、协同凝集试验 (co-agglutination test，COAG) 葡萄球菌A蛋白(Staphylococal Protein A,SPA)是金黄色葡萄球菌的特异性表面抗原，能与多种哺乳动物lgG分子的Fc片结合。SPA与lgG结合后，后者的Fab片暴露于外，并保持其抗体活性，当此SPA-特异性抗体与相应的抗原结合时，就可产生凝集反应。本法广泛应用于多种细菌和某些病毒的快速诊断。 （三）、间接凝集抑制试验 二、沉 淀 试 验 可溶性抗原 (如细菌的外毒素、内毒素、菌体裂解液，病毒的可溶性抗原、血清、组织浸出液等)与相应抗体结合，在适量电解质存在下，形成肉眼可见的白色沉淀，称为沉淀试验 (precipitation test)。 参与沉淀试验的抗原称沉淀原，抗体称为沉淀素。 （一）环状沉淀试验 是最简单、最古