《食品中罗丹明B的快速检测胶体金免疫层析法》（征求意见稿）.docxVIP

——PAGE \* MERGEFORMAT38— —PAGE \* MERGEFORMAT6—— 附件3 食品中罗丹明B的快速检测胶体金免疫层析法 1 范围 本方法规定了食品中罗丹明B的胶体金免疫层析快速检测方法。 本方法适用于辣椒粉和辣椒酱中罗丹明B的快速测定。 2 原理 本方法的测定以竞争抑制免疫层析原理为基础。样品中的罗丹明B经有机试剂提取，固相萃取小柱净化，浓缩复溶后，罗丹明B与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体和微孔膜检测线（T线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。无论样本中是否含有罗丹明B，控制线（C线）均会显色。通过检测线与控制线颜色深浅比较，对样品中罗丹明B残留进行定性判定。 3 试剂和材料 除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的二级水。 3.1 试剂 3.1.1 正己烷。 3.1.2 丙酮。 3.1.3 甲醇。 3.1.4磷酸氢二钠，Na2HPO4·2H2O。 3.1.5 磷酸二氢钠，NaH2PO4·2H2O。 3.1.6 提取试剂：将正己烷与丙酮按照体积比80:20混匀。 3.1.7 复溶液：称取35.61g磷酸氢二钠(3.1.4)置于1000ml容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，制成0.2mol/L溶液A；称取31.21g磷酸二氢钠(3.1.5)置于1000ml容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，制成0.2mol/L溶液B。将溶液A与溶液B按照体积比67:33混匀，制成pH 7.1磷酸盐缓冲液。 3.2 参考物质 罗丹明B参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分之式、相对分子量见表1，纯度≥98.6% 表1 罗丹明B参考物质中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量 中文名称英文名称CAS登录号分子式相对分子量罗丹明BRhodamine B81-88-9C28H31C1N2O3479.01注：或等同可溯源物质。 3.3标准溶液配制 3.3.1 罗丹明B标准储备液（1 mg/mL）：精密称取罗丹明B参考物质（3.2）10 mg，置于10 mL 容量瓶中，用甲醇（3.1.3）溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1 mg/mL 的罗丹明B标准储备液。冷藏，有效期6个月。 3.3.2 罗丹明B标准中间液A（1 μg/mL）：精密量取罗丹明B标准储备液（1 mg/mL）（3.3.1）0.1 mL，置于100 mL 容量瓶中，用甲醇（3.1.3）稀释至刻度，摇匀，制成 1 μg/mL的罗丹明B标准中间液A。临用新制。 3.3.3罗丹明B标准中间液B（100ng/mL）：精密量取罗丹明B中间液A（1μg/mL）（3.3.2）1 mL，置于10 mL 容量瓶中，用甲醇（3.1.3）稀释至刻度，摇匀，制成 100ng/mL的罗丹明B标准中间液B。临用新制。 3.4材料 3.4.1固相萃取小柱：中性氧化铝柱，1000mg/6ml。 3.4.2免疫胶体金试剂盒（在2℃～8℃、干燥、避光条件下保存，在产品有效期内使用）。 3.4.2.1 金标微孔。 3.4.2.2 试纸条或检测卡。 4 仪器和设备 4.1 移液器：200 μL、1 mL 和10 mL。 4.2 涡旋混合器。 4.3 离心机：转速≥4000 r/min。 4.4 电子天平：感量分别为 0.01 mg 和 0.01 g。 4.5 振荡器。 4.6 样品浓缩仪：如有需要。 4.7环境条件:温度：15℃～25℃，相对湿度：≤60%。 5分析步骤 5.1试样制备 取具有代表性样品约500 g，充分粉碎混匀，均分成两份，分别装入洁净容器作为试样和留样，密封，标记，于常温保存。 5.2试样提取和净化 准确称取试样2g（精确至0.01g）置于50mL具塞离心管中，依次加入20mL提取剂（3.1.6），振荡提取3min，以5000r/min 离心5min。上清液待净化。 吸取5mL提取剂（3.1.6）于固相萃取小柱中，流出液弃去。将上清液全部转移至固相萃取小柱中，流出液弃去。再加入20mL提取剂（3.1.6）淋洗固相萃取小柱，流出液弃去。用5mL甲醇洗脱小柱，收集洗脱液吹干。精密加入500μL复溶液（3.1.7），涡旋混合1min，作为待测液。 5.3 测定步骤 5.3.1 试纸条与金标微孔测定步骤 吸取200μL样品待测液于反应微孔（3.4.2.1）中，抽吸 5～10 次使混合均匀，室温温育 5 min；温育结束后，将检测试纸条（3.4.2.2）吸水海绵端垂直向下插入反应微孔中，室温温育 5～8 min，从微孔中取出试纸条，去掉试纸条下端的吸水海绵，进行结果判定。 5.3.2 检测卡与金标微孔测定步骤 吸取全部样品待测液于反应微孔（3.4.2.1）中，抽吸 5～10 次使混