一轮复习生物课时课件第41课时 基因工程的基本工具和基本操作程序.pptxVIP

1.转基因抗病香蕉的培育过程 如图所示。质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ 等四种限制酶切割位点。请回答: (1)构建含抗病基因的表达载体A时,应选用限制酶 ,对 进行切割。 (2)培养基中的卡那霉素会抑制香蕉愈伤组织细胞 的生长,欲利用该培养基筛选已导入抗病基因的香 蕉细胞,应使基因表达载体A中含有 , 作为标记基因。 (3)香蕉组织细胞具有 ,因此, 可以利用组织培养技术将导入抗病基因的香蕉组 织细胞培育成植株。图中①、②依次表示组织培 养过程中香蕉组织细胞的 。 解析 本题考查基因工程的有关知识。(1)从图可 看出,只有PstⅠ、EcoRⅠ两种酶能保持抗病基因结 构的完整性,所以构建含抗病基因的表达载体A时, 应选用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ两种酶,对抗病基因的 DNA和质粒进行切割。 (2)卡那霉素能抑制香蕉愈伤组织细胞的生长,欲 利用该培养基筛选已导入抗病基因的香蕉细胞,应 使基因表达载体A中含有抗卡那霉素基因,以此作 为标记基因。 (3)香蕉组织细胞具有全能性,因此,可以利用组织 培养技术将导入抗病基因的香蕉组织细胞培育成 植株。图中①、②依次表示组织培养过程中香蕉 组织细胞的脱分化和再分化。 答案 (1)PstⅠ、EcoRⅠ含抗病基因的DNA、 质粒 (2)抗卡那霉素基因(3)全能性 脱分化、再分化2.将动物致病菌的抗原基因导入 马铃薯制成植物疫苗,饲喂转基因马铃薯可使动物 获得免疫力。以下是与植物疫苗制备过程相关的 图和表。 表1 引物对序列表引物对AP1 AACTGAAATGTAGCTATCP2 TTAAGTCCATTACTCTAG引物对BS1 GTCCGACTAGTGGCTGTGS2 AGCTGGCGTTTAGCCTCG 请根据以上图表回答下列问题: (1)在采用常规PCR方法扩增目的基因的过程中,使 用的DNA聚合酶不同于一般生物体内的DNA聚合酶, 其最主要的特点是 。 (2)PCR过程中退火(复性)温度必须根据引物的碱 基数量和种类来设定。表1为根据模板设计的两对 引物序列,图2为引物对与模板结合示意图。请判 断哪一对引物可采用较高的退火温度？ 。限制酶Alu IEco R IPst ISma I切割位点AG↓CTTC↑GAG↓AATTCCTTAA↑GCTGCA↓GG↑ACGTCCCC↓GGGGGG↑CCC (3)图1步骤③所用的DNA连接酶对所连接的DNA两 端的碱基序列是否有专一性要求？ 。 (4)为将外源基因转入马铃薯，图1步骤⑥转基因 所用的细菌B通常为 。 (5)对符合设计要求的重组质粒T进行酶切。假设 所用的酶均可将识别位点完全切开，请根据图1中 标示的酶切位点和表2所列的识别序列，对以下酶 切结果作出判断。 ①采用EcoR I和Pst I酶切,得到 种DNA片断。 ②采用EcoR I和Sma I酶切,得到 种DNA片断。 解析 (1)PCR技术中需通过高温使DNA解旋,故所 用DNA聚合酶的耐热性必须要好。(2)退火温度与 时间,取决于引物的长度、碱基组成及其浓度,还 有靶基因序列的长度。含有(G+C)多的引物,可采 用相对较高的退火温度。(3)DNA聚合酶与限制酶 不同,从将DNA由5’端点开始复制到3’端的酶,不具 有特异性。(4)农杆菌的细胞中有一段T-DNA,农杆 菌通过侵染植物伤口进入细胞后,可将T-DNA插入 到植物基因中,因此,农杆菌是一种天然的植物遗 传转化体系,常用作植物转基因工程中的载体。 (5)对于重组质粒,EcoRI能切开M和X连接处,PstI能 在M和N之间专一切点处切开,将DNA分为两个片段; EcoRI仍能切开M处,SmaI则不能识别N和Y重新结合 形成的连接点,只能得到1个DNA片段。 答案 (1)耐高温(2)引物对B (3)否 (4)农杆菌(5)①2 ②13.基因工程中,需使用的限制酶切割目的基因和质粒, 便于重组和筛选。已知限制酶Ⅰ的识别序列和切 点是—G↓GATCC—,限制酶Ⅱ的识别序列和切点 是—↓GATC—。 (1)根据已知条件和图回答： ①上述质粒用限制酶 切割,目的基因 用限制酶 切割。 ②将切下的目的基因片段插入质粒的切口处,还要 加入适量的 。 ③请指出质粒上至少要有一个标记基因的理由： 。 (2)不同生物的基因可以拼接的结构基础是 。 (3)大肠杆菌是首先成功表达外源基因的宿主菌, 但不能表达结构复杂的蛋白质,哺乳类细胞、昆虫 细胞表达系统虽然能表达结构复杂的哺乳类细胞 蛋白,但操作复杂,表达水平低,不易推广使用。基 因工程中常选用酵母菌作为受体细胞,请从细胞结 构等方面分析用酵母菌作受体细胞能克服上述不 足的理由： 。 答案 (1)①Ⅰ Ⅱ ②DNA连接酶 ③检测重组质 粒(或目的基因)