重视碳青霉烯类耐药革兰阴性杆菌的检测（孙长贵兰州）课件_1.pptVIP

其他型碳青霉烯酶分布 * 解放军第一一七医院检验科 * 四、实验室检测 * 解放军第一一七医院检验科 * 四、实验室检测 由碳青霉烯酶介导的耐药，在临床实验室可通过常规表型试验方法来检测，包括纸片扩散法和改良Hodge试验。最终鉴定需检测耐药基因来进行确认。 * 解放军第一一七医院检验科 * 表型检测－纸片扩散、MIC Etest * * 解放军第一一七医院检验科 CLSI推荐解释标准M100文件 表型检测－纸片扩散法 药物 CLSI M100-S19 CLSI M100-S 23 S I R S I R 多利培南 － － － ≥23 20-22 ≤19 厄他培南 ≥19 16-18 ≤15 ≥23 20-22 ≤19 亚胺培南 ≥16 14-15 ≤13 ≥23 20-22 ≤19 美罗培南 ≥16 14-15 ≤13 ≥23 20-22 ≤19 解放军第一一七医院检验科 表型检测－MIC法 * 解放军第一一七医院检验科 * 药物 CLSI M100-S19 CLSI M100-S 23 S I R S I R 多利培南 － － － ≤1 2 ≥4 厄他培南 ≤2 4 ≥8 ≤0.25 0.5 ≥1 亚胺培南 ≤4 8 ≥16 ≤1 2 ≥4 美罗培南 ≤4 8 ≥16 ≤1 2 ≥4 耐药酶表型检测 * 解放军第一一七医院检验科 * KPC-产生菌实验室检测： 问题: 1、某些分离菌株被证明低水平对碳青霉烯类耐药 2、某些自动化系统缺泛检测低水平碳青霉烯类耐药 　　的能力。 碳青霉烯酶表型试验 改良Hodge试验（Modified Hodge Test ） 100% sensitivity in detecting KPC; also positive when other carbapenemases are present 100% specificity Procedure described by Lee et al. CMI, 7, 88-102. 2001. * * 解放军第一一七医院检验科 Modified Hodge Test Lawn of E. coli ATCC 25922 1:10 dilution of a 0.5 McFarland suspension Imipenem disk Test isolates Described by Lee et al. CMI, 7, 88-102. 2001. * 解放军第一一七医院检验科 * 双纸片协同试验－金属酶 * * 解放军第一一七医院检验科 双纸片增效试验 * * 解放军第一一七医院检验科 KPC 、NDM-1等酶产生菌最终确定 PCR 检测耐药基因 确认方法 * * 解放军第一一七医院检验科 * * 解放军第一一七医院检验科 * 测序结果判读 * * 测序彩图：峰体清晰、无套峰 序列比对 * 解放军第一一七医院检验科 * 测序结果经BLAST与基因数据为中已知序列比对分析，最终确定基因型。 /nuccore 产KPC 菌株治疗 替加环素 (100.0% 有效) 黏菌素 (88.1% 有效) SENTRY report. AAC. 2008. Feb;52(2):570-3 米诺环素 根据药敏试验选择 * 解放军第一一七医院检验科 新德里金属-?-内酰胺酶（NDM-1) * * 解放军第一一七医院检验科 First reported in 2009 from patient who traveled to India Additional 183 isolates reported in 2010 from India, Pakistan, U.K., and U.S. - K. pneumoniae, E. coli, Enterobacter, Proteus, Citrobacter NDM-1 carried on plasmids of various sizes Yong, AAC 53:5046, 2009; Kumarasamy, Lancet 3099, 2010; Patel, 2010 NDM-1 实验室检测： 常规药敏试验方法 分子生物学方法 * * 解放军第一一七医院检验科 NDM-1 基因确证　 采用blaNDM-1基因特异引物进行PCR扩增及产物测序，确定菌株是否携带blaNDM-1基因。 引物一： 上游5′-ACCGCC TGG ACC GATGACCA-3′　 下游5′-GCCAAAGTTGGGCGC GGTTG-3′ 引物二： 上游5′-GGCGGAATGGCTCATCACGA-3′ 下游5′-CGCAACACAGCCTGAC