分子生物学第六章RNA的转录与加工.pptVIP

第六章 RNA的转录与加工 6.1? 转录(Transcription)概述 6.2? RNA聚合酶 6.3? 转录的启始、延伸和终止 6.4? 转录后的加工 6.1? 转录概述 转录指的以DNA为模板，在RNA聚合酶催化下通过DNA链上的碱基配对来合成RNA的反应。 启动子：与RNA聚合酶特异性结合以起始转录的一段DNA序列。 终止子：引起转录终止的一段DNA序列。富含GC对。 增强子：调节启动子，增强转录效率的一段DNA序列。 6.1.1 RNA合成的基本特征 ①合成RNA的底物是NTP，包括ATP、GTP、CTP和UTP。 ②在RNA聚合酶的作用下，一个NTP的3-OH和另一个NTP的5-P反应，形成磷酸二酯键。 ③RNA的碱基顺序由DNA的顺序决定，以双链DNA分子中的一条链为模板，按碱基互补配对原则合成。 ④RNA合成的方向是5→3。 ⑤在RNA的合成中不需要引物。 转录与复制的异同？ 转录与复制存在三个主要不同点： A．转录中不需要RNA引物、以4种三磷酸核糖核苷（NTP）为底物 ； B．转录反应一般只用一小段DNA做模板； C．在转录区，一般都只有一条DNA链可以作为模板。 6.1.2 转录的基本过程 无论是原核细胞还是真核细胞，转录的基本过程都包括：起始、延伸和终止。 ①起始 指的是RNA聚合酶结合到双链DNA上，局部解链，使得底物NTP与模板链的碱基能够配对。随着约9nt(核苷酸)!?的掺入，起始阶段结束。 ②延伸阶段 是底物NTP加到生长的多核苷酸链的3端，在解螺旋区形成暂时的RNA-DNA杂合分子。聚合酶沿着DNA移动，下游的双螺旋再解开一段，使模板链不断暴露出新的单链部分。随着聚合酶向前移动，合成的RNA从模板DNA上脱开，模板DNA与有意义链配对形成双链。 ③终止反应 包括识别特定的终止位点，碱基不再加到链上，转录复合物停止移动，酶和RNA从模板上释放。 6.1.3 原核和真核生物基因转录的差别 ①原核生物只有一种RNA聚合酶，负责转录所有类型的基因，而真核生物有三种以上的RNA聚合酶，负责不同类型基因的转录，在细胞核内的位置也不相同。 ②转录产物有差别。真核的初始产物很长，包括有内含子序列，加工后成熟的mRNA只占其中的一小部分。而原核生物的初始产物与编码的蛋白成线性关系。 ③真核生物转录产物要经过加工修饰过程。 ④原核的mRNA是多顺反子，而大多数真核mRNA是单顺反子。 把只编码一个蛋白质的mRNA称为单顺反子mRNA。 把编码多个蛋白质的mRNA称为多顺反子mRNA。 多顺反子mRNA是一组相临或相互重叠基因的转录产物，这样的一组基因可被称为一个操纵子（operon）。 操纵子（operon）:是包含几个基因（可作为一个多顺反子的转录物被转录）及其共同调控元件的原核生物基因座。 基因座（gene loci）：是指染色体上一个基因的位置，包括两侧的调控元件。其本义是指任何标记物的位置（包括基因、调控元件、复制起始区、细胞遗传学中的标记）。 6.2.1 原核生物的RNA聚合酶 6.2.1.1 大肠杆菌(E.coli)RNA聚合酶的组成及各亚基的功能 E.coli和其它原核细胞一样，只有一种RNA聚合酶。 正常情况下一个大肠杆菌细胞中大约有7000个RNA聚合酶分子。 E.coli RNA聚合酶的全酶 由5个亚基组成，即α2ββσ，分子量为480KD;其中α2ββ构成核心酶，核心酶与σ因子构成全酶。 表6-1 E.coliRNA聚合酶的基本性质 亚基 基因 全酶中的数量 分子量D 部位 可能的功能 α rpoA 2 40000 核心酶 结合启动子 β rpoB 1 155000 核心酶 结合核苷酸 β‘ rpoC 1 160000 核心酶 结合模板 σ rpoD 1 85000 σ因子 起始识别因子 ？ ？ 1 11000 核心酶 ？ 不同的原核生物，具有基本相同的核心酶，但其σ亚基有所差别，决定了原核基因的选择性表达。 6.2.1.2 大肠杆菌RNA聚合酶的催化活性 RNA聚合酶全酶结合到启动子区，在DNA链上形成起始复合物开始转录。当酶沿着模板移动，RNA链延伸。σ因子释放，由核心酶负责RNA链的延伸。核心酶覆盖大约60bp 的DNA区域，其中解链部分17bp;生长着的RNA链的底物NTP结合位点之前的一段