产淀粉酶芽孢杆菌的分离筛选和发酵.pptVIP

产淀粉酶芽孢杆菌的分离筛选及发酵;项目名称;1产淀粉酶芽孢杆菌的初筛初筛准备;淀粉培养基：;初筛方案;表1 初筛结果一;分区划线;表2 初筛结果二;将分区划线生长好的菌落进行点接培养，用枪头蘸取平皿中长势良好的（划线法中较好的菌株后代）进行点接培养，并作平行试验。;革兰氏染色;;芽孢染色;;产淀粉酶芽孢杆菌的复筛;ＤＮＳ试剂的制备：称取０.６５ｇDNS溶于少量热蒸馏水中，溶解后移入100ml容量瓶中，加入2mol/L氢氧化钠溶液32.5ml,再加入4.5ml丙三醇，摇匀，冷却后定容至100ml。 ;;; 1.发酵液离心(8000r/min 5min),然后弃菌体。 2.取离心发酵液1ml加入5ml 1%淀粉溶液水浴37度5分钟（淀粉水解）再沸水浴5分钟（使酶失活）再取1ml处理液并加入ＤＮＳ２ｍｌ沸水浴迅速冷却再加入９ｍｌ蒸馏水，540nm测定波长。 ３.取１ｍｌ上清液加入５ｍｌ1%淀粉溶液直接沸水浴５分钟，再取1ml处理液并加入ＤＮＳ２ｍｌ沸水浴迅速冷却再加入９ｍｌ蒸馏水。 ;;平板扩散法测酶活;表６　平板扩散法复筛结果;菌种保藏 1.试管斜面保藏 配培养基灭菌制作试管斜面，划线接种３７°Ｃ恒温培养４８小时，密封冷冻保存。（标签） ２.甘油管保藏 取1ml蒸馏水和1ml甘油配制成５０％甘油灭菌，取液体菌种２ｍＬ加入甘油管中混匀，培养、密封（-20摄氏度）冷冻保存。（标签） ; 种子的扩大培养 根据DNS法和平板法的结果选出生长旺盛的菌种 ;发酵罐的消毒灭菌;灭菌后加入培养基进行实消，打开夹套排污阀（０.１１ｍｐａ至９５度）向管内进蒸汽 （１２１度２０分钟）　 　　进行换气（罐压力０．０５至０.０８ｍｐａ），最后降温至发酵所需的温度。;实消结束后接入菌种 确认罐压（0.05-0.08）擦干净接种区域，放上火焰圈点燃后，往火焰中间倒菌种。 搅拌均匀后，先通入蒸汽放出废液，再取样，每半个小时取一次样。测定菌种量的变化和酶的活性。; 产淀粉酶芽孢杆菌生长曲线的测定 以培养基和稀释5倍的培养基做空白，把每半小时取一次样的菌液稀释5倍(2ml菌液加8ml蒸馏水)的液体和原菌液放入比色皿中，用分光光度计测定OD值。 ;;;;发酵完成后，放出发酵罐中的发酵液，清洗发酵罐。 整理实验台，清洗仪器。 打扫实验室卫生。