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桃果实类胡萝卜素测定方法研究 　　摘要： 【目的】为了探讨桃果实中类胡萝卜素含量的测定方法，分析桃果实中类胡萝卜素的主要成分及其含量，【方法】以桃品种‘独立’成熟果实为试验材料，采用紫外分光光度计法和高效液相色谱法对不同提取剂、提取方法、色谱柱进行分析比较，筛选出适宜进行桃果实类胡萝卜素定性定量分析的方法。【结果】结果表明，桃果实类胡萝卜素的最佳测定方法是以丙酮为有机提取剂，不经过皂化直接提取，经过0.22 mm有机滤头过滤，采用YMC-C30色谱柱进行测定，流动相A： 甲醇，流动相B： 甲基叔丁基醚，流动相C： 水；流速： 1.0 mL·min-1；UV 450 nm；温度为25 ℃；时间： 100 min；进样： 20 μL；梯度冲洗： 0～90 min，81%A/15%B/4%C～6%A/90%B/4%C；92 min，81%A/15%B/4%C。【结论】提取和高效液相色谱检测方法可对桃果实类胡萝卜素进行定性定量分析。 　　关键词： 桃； 类胡萝卜素； 组分； 高效液相色谱 　　桃是世界上重要的落叶果树之一，我国桃树栽培历史悠久，资源丰富，是桃的起源中心。1990年Morrison[1]报道认为100 g果肉为黄色的果实中含289 mg β-胡萝卜素，100 g果肉为橙黄色的果实中含445 mg β-胡萝卜素，而白肉桃果肉内不含β-胡萝卜素。充分成熟的桃果实中主要呈色色素是类胡萝卜素，其含量及组成影响黄桃和红肉桃果实的色泽，继而影响品质和商品价值。类胡萝卜素为脂溶性的天然色素，除了在植物光合系统中不可或缺，对人体也有不可替代的作用。目前在柑橘、枇杷、枸杞、杧果、沙棘等研究较多。 　　类胡萝卜素的检测方法主要有分光光度法、薄层色谱法、高效液相色谱法。分光光度法能用于测定纯类胡萝卜素的量或浓度，或用来估算混合物或天然萃取物中的总类胡萝卜素含量，但精确度相对较低。崔丽娜等[2-6]对玉米籽粒、番木瓜、胡萝卜渣干燥过程、银杏叶片、沙棘油的研究以及许建兰等[7]等对类胡萝卜素含量的测定采用均采用分光光度法。薄层色谱法具有操作简便、快速等特点，比较多的用于定性分析。 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 　　试验样品： 黄肉桃‘独立’（Prunus persica‘Indenpendence’）。于2011年7月中旬，采自江苏省农业科学院国家果树种质桃资??圃。采收成熟果实10个，取混合果肉约10 g，于-70 ℃保存备用。 　　仪器： 紫外-可见分光光度计；高效液相色谱仪；冷冻离心机。 　　1.2 方法 　　1.2.1 类胡萝卜素的提取 称取2 g左右的混合新鲜果肉，液氮研磨，加入8 mL的有机溶剂，4 ℃冰箱避光浸提。浸提后于离心机4 ℃ 10 000 g离心5 min，重复操作直至残渣为无色，合并浸提剂，定容至25 mL，过0.22 mm有机滤头，备用。每个处理重复3次。 　　1.2.2 有机溶剂的确定 采用不同的有机提取剂及配比，提取步骤同1.2.1。有机提取剂分别为甲醇、丙酮、正己烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮石油醚（1∶1）、丙酮正己烷（3∶2）、丙酮乙酸乙酯（3∶2）。 　　1.2.3 提取方法的确定 采用3种不同的提取方法提取类胡萝卜素。 　　方法一： 直接用丙酮提取后定容测定； 　　方法二： 丙酮提取后经40 ℃旋转蒸发仪上蒸干后，用4 mL乙酸乙酯溶解测定； 　　方法三： 丙酮提取后经40 ℃旋转蒸发仪上蒸干，用4 mL的石油醚溶解，加入4 mL 10%KOH-甲醇溶液，皂化过夜，加入10%NaCl分层萃取，下层水相用石油醚萃取2次，合并石油醚相，于40 ℃旋转蒸发仪上蒸干，用4 mL乙酸乙酯溶解后测定。 　　1.2.4 混合标样的制备 以10 mg·L-1的混合标样溶液为标准储备溶液，制备系列质量浓度为0.005、0.01、0.05、0.1、0.25、0.5、0.75、1.0、5.0 mg·L-1的标准使用溶液，过0.22 mm有机滤头，备用。 　　1.2.5 类胡萝卜素的测定 利用UV755B型紫外-可见分光光度计，以丙酮溶液为空白，在波长300～700 nm扫描，确定最佳吸收波长，并测定独立果实类胡萝卜素的总含量；采用Agilent1100 series高效液相色谱仪进行梯度冲洗，测定类胡萝卜素的各组分和含量。 　　2.1 最佳类胡萝卜素提取条件的筛选 　　2.1.1 不同有机溶剂提取效果的比较 不同种类和组合的有机溶剂提取类胡萝卜素的效率有一定的差异。按1.2.1方法提取后测定，结果表明， 8个有机溶剂对果实类胡萝卜素的提取都有一定的影响，其中以丙酮提取的含量最多；如图1所示。通过SPSS12.0软件分析，丙酮的提取效果与其余的7个有机溶剂间存在极显著差异，因此确定丙酮为桃果实类胡萝卜素提取的有效有机溶剂