光合、荧光测定技术在艺植物研究中的应用.ppt

测定光反应仪器 光合作用（暗反应）研究中常用参数 二、光合测定技术在园艺植物研究中应用 园艺植物光合作用研究意义 干物质的90%以上来源于叶片的光合作用，通过光合作用形成碳水化合物是产量形成的主要物质基础，因此，研究园艺植物的光合生产对于揭示产量形成的规律具有重要的意义。 改善光合性能是提高产量的关键因素。 园艺植物光合作用研究内容 （1） 园艺植物种类、品种和砧木的光合特性比较 （2） 叶片发育过程中的光合特性 （3） 环境因素对光合作用的影响（温、光、水、土） （4）栽培管理因素对光合生产力的影响（栽植方式、栽植密度、整形方式等） （5）各种试验处理对植株影响的（只要涉及植物的生长发育）光合作用机理。 （6）从分子角度，如转基因后表达等 光合测定技术与数据分析  各种响应曲线 叶片发育进程光合作用特征 日变化和季节变化 光合特性对环境条件的响应等 Pn－Ci/Ca 响应曲线 A为CO2(Ci)补偿点； B为实际大气CO2浓度的光合速率； C为细胞间隙浓度等于大气CO2浓度时的 光合速率； D为CO2 浓度饱和时的光合速率Jmax，相当与RUBP最大再生速率； CE为响应曲线初始斜率表示羧化效率；  园艺植物光合研究测定技术实用技巧 1.试材选择具有代表性、一致性（可用光合仪预选） 2.时间选择（光合参数测定在上午9时-11时最好） 3.测试项目的选择（根据想要说明问题设计测试指标，不必全部平行） 4.立意的选择（如植物分根实验） 5.做图技巧 气孔限制值的计算 1. 制作Pn－Ci 响应曲线 A 为实际大气CO2浓度的光合速率； Ao为气孔阻力为零时，即细胞间隙浓度等于大气CO2浓度时的 光合速率； 气孔限制值Ls为 Ls=(A0-A)/A Ls= (Ca-Ci)/Ca 光破坏的概念 当过剩的光能不能及时有效地排散时，对光合机构造成不可逆的伤害，如对光合色素造成光漂白、光合作用中心D1蛋白的降解及光合机构的光氧化等。 3P680 + O2 P680 + 1O2 氧化性极强的1O2首先攻击反应中心色素P680，使PSⅡ反应中心失去电荷分离能力，最终引起D1蛋白降解.PSⅡ受体侧电子传递受阻时易产生此种破坏。 Fd－ + O2 Fd + O2·－ O2。－启动类囊体膜的脂质过氧化，破坏光合色素、类囊体系统以及膜结合酶使电子传递效率下降，严重时使电子传递系统失活。 P680+ + β－Car P680 + β－Car+ PSⅡ受体侧电子传递受阻时易产生此种破坏。P680+还能氧化D1蛋白肽链中酪氨酸残基和叶绿素等色素。 快速叶绿素荧光诱导动力学的应用O，I,J,P 分析 叶绿素荧光诱导动力学曲线 典型的快速叶绿素荧光诱导动力学曲线（O-J-I-P荧光诱导曲线） Drought: 8.6.2004 Winter Wheat Drought: 11.6.2004 O-J-I-P荧光诱导曲线的意义 O：PSⅡ的电子受体（QA、QB、PQ等）处于最大程度氧化态时的荧光，最小荧光。O点时电子受体主要状态：QAQBPQ。O相的荧光强弱与反应中心色素含量的多少及组成有关。 J：PSⅡ的电子受体QA第一次处于瞬时最大程度还原态时的荧光。J点时电子受体主要状态：QAQB-，QA-QB-。 I：反应了PQ库的异质性,即快还原型PQ库和慢还原型PQ库的大小。I点时电子受体主要状态：QA-QB2-。 P：PSⅡ的电子受体（QA、QB、PQ等）处于最大程度还原态时的荧光，最大荧光。 P点时电子受体主要状态：QA-QB2-，PQH2。 如何测定叶绿素荧光？ 现有两类荧光仪可以用来测定叶绿素荧光。 1.续激发式荧光仪（如PEA)，必须将测定叶片在避光下测定，在照光条件下，仪器无法区分叶绿素荧光和自然光中与荧光波长相同的红光和远红光。 但是这类荧光仪有很高的分辨率，每秒钟能够测定10万次荧光变化，因此是研究光合机构中电子传递瞬间变化的有力工具。 2.脉冲调制式荧光仪（如FMS-2)，可以避免上述问题。在测定时，仪器提供一种脉冲调制式光，能诱导出的脉冲式的荧光。当有其它光线同时存在时，会产生以下三种光信号（1）自然光中具有荧光波长的红光信号 （2）自然光诱导的非脉冲荧光信号 （3）脉冲调制光诱导的脉冲荧光信号 仪器排除前两种信号，监测脉冲荧光信号的变化 Fv/Fm =(Fm-Fo)/Fm ； qP=(F’m-Ft )/(F’m-F’o) ； ΦPSII =(F’m-Ft )/F’