自噬基因Beclin1在喉鳞癌患者中表达及临床意义.docVIP

自噬基因Beclin1在喉鳞癌患者中表达及临床意义 　　【摘要】 目的：探讨自噬基因Beclin1在喉鳞癌组织中的表达及其临床意义。方法：应用免疫组织化学SP法检测77例喉鳞癌组织和22例正常组织中Beclin1的表达，分析Beclin1的表达与喉鳞癌生物学行为的关系。结果：Beclin1表达主要位于细胞浆，与正常组织比较，喉鳞癌组织中Beclin1的蛋白表达阳性率明显降低（P0.05），与喉癌的T分期、分化程度及淋巴结转移相关（P 　　【关键词】 喉鳞癌； Beclin1； 免疫组织化学 　　喉癌是头颈部常见的恶性肿瘤之一，严重威胁着患者的健康，其组织来源于喉黏膜上皮组织，最常见的喉癌为喉鳞状细胞癌[1-2]。自噬可以清除损伤组织，减少氧化应激的发生，从而维持细胞内环境稳定，降低突变率，抑制肿瘤的形成，而自噬的缺陷与肿瘤的发生关系密切[3]。Beclin1基因位于人染色体17q21，是第一个被发现的哺乳动物的自噬基因，在多种肿瘤中表现为表达降低和缺失，Beclin1表达缺失明显增加肝癌、肺癌和淋巴瘤的发生率，但自噬基因Beclin1的表达与喉癌的关系尚不清楚[4]。本研究通过检测喉鳞癌患者组织中自噬基因Beclin1的表达，探讨自噬基因Beclin1与喉鳞癌发生发展的关系。 　　1 材料与方法 　　1.1 组织标本来源 喉鳞癌标本由山西省肿瘤医院提供，共收集2005年1月-2007年12月行手术切除和病理确诊的77例喉鳞癌患者组织。其中男71例，女6例。年龄41～79岁，平均59.3岁。40例声门上型患者，30例声门型，6例声门下型，1例临床分型不确定。病理分类：5例高分化鳞癌，64例中分化鳞癌，8例低分化鳞癌。4例T1期患者，26例T2期患者，31例T3期患者，11例T4期患者，5例T分期不确定。15例有淋巴结转移，62例患者无淋巴结转移，纳入患者确诊时均无远处转移。所有患者手术前未经化疗和放疗，经病理检查均确认为鳞状细胞癌。手术切除的标本用10%甲醛固定，石蜡包埋，组织切片厚度4 μm 3张，对各1张组织切片进行HE、免疫组织化学染色、1张备用。另外选取22例正常喉组织，其中男20例，女2例，年龄44～75岁，平均58.5岁。两种组织标本一般资料比较差异无统计学意义（P0.05），具有可比性。 　　1.2 主要试剂 Beclin1和p-PKB为多克隆兔抗人抗体，购自Santa Cruz公司，多克隆兔抗人p110α及hvps34抗体购自Abgent公司。过氧化物酶标记的链霉卵白素试剂盒和DAB试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。 　　1.3 检测方法 免疫组化采用S-P法，依据说明书进行操作。Beclin1稀释倍数为1∶20。结果的判断所有切片采用盲法由两位病理科医生独立阅片，细胞浆内出现棕黄色颗粒为阳性细胞。结果采用两种方法：（1）染色结果判定：每例标本以400倍光镜下随意选取10个视野，计数每个视野中100个肿瘤细胞中的阳性细胞数，取其平均数求其阳性百分率作为结果。平均阳性细胞所占比例5%判定为阳性。（2）在×100下观察全片，选择5个阳性物质丰富的视野，然后采用Image-Pro Plus 4.5分析软件在×400下测定阳性物质的积分光密度值（integrated optical density，IOD），计算平均IOD值。 　　1.4 统计学处理 采用SPSS 16.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，比较采用t检验，计数资料采用 字2检验，理论频数小于5时采用Fisher确切概率法。以P0.05）；在组织学分化分组中，与低分化的喉癌比较，Beclin1在高、中分化的喉癌组织中的量及阳性率均明显增高表达（P 　　自噬不仅在调控肿瘤的生成有重要的作用，并且与肿瘤的生长和转移有关。在临床上，肿瘤的临床分期、组织学分级以及淋巴结转移等因素是喉癌恶性程度以及预后的重要指标[9-10]。患者临床分期越晚，组织学分化越差，其侵袭与转移能力也越强，预后越差[11]。本研究发现Beclin1的蛋白表达与喉癌的临床分型无相关性，但是T1+T2中Beclin1蛋白表达高于T3+T4组，表明Beclin1的蛋白表达与喉癌的T分期有显著相关性，表明Beclin1的表达与喉癌的临床进展有关。在不同分化喉癌组的比较中，高、中分化组与低分化组的比较时，Beclin1表达明显增高，表明肿瘤细胞分化程度越低，恶性程度越高，自噬能力也减弱地更加明显，提示Beclin1表达降低和喉癌的预后相关。喉癌患者淋巴结转移是其重要转移途径，本研究发现淋巴结转移组和非转移组相比，Beclin1表达降低，提示Beclin1表达降低与淋巴结转移相关。有研究表明，自噬可能是抑制肿瘤血管形成和分布的一种方式[12]。 　　综上所