鱼油对老年Ⅰ期压疮模型大鼠免疫功能、炎症反应及细胞凋亡影响.docVIP

鱼油对老年Ⅰ期压疮模型大鼠免疫功能、炎症反应及细胞凋亡影响 　　[摘要] 目的 探讨鱼油对老年Ⅰ期压疮大鼠细胞免疫、炎症反应及细胞凋亡的影响。 方法 随机将20只老年SD大鼠分成三组，正常组和模型组各6只，采取普通饲料喂养，鱼油干预组8只给予普通饲料加1.6 g/（kg·d）鱼油灌胃喂养20 d。正常组不受压，模型组和鱼油干预组承受22.47 kPa压力2 h后三组大鼠一起实施安乐死。采集受压组织中心标本，行常规石蜡切片、HE染色及TUNEL荧光标记；光镜下观察三组大鼠皮肤肌肉组织病理变化；检测10%匀浆肌组织中白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-6（IL-6）、一氧化氮（NO）、一氧化氮合酶（NOS）的含量和活性及细胞凋亡指数（AI）的变化。 结果 受压组织病理形态学显示，与模型组相比，鱼油干预组受压表皮及组织炎症细胞浸润少，受压组织受损程度明显减轻（P=0.00）。与正常组比较，模型组IL-2、IL-6、NO、NOS及AI水平均显著增高（P=0.00）；与模型组比较，鱼油干预组IL-2、IL-6、NO、NOS及AI水平均显著降低（P=0.00）。 结论 鱼油的早期应用可有效抑制受压组织的免疫、炎症反应和细胞凋亡，从而降低老年压疮发生率。 　　[关键词] 鱼油；压疮；老年；免疫功能；炎症反应；细胞凋亡 　　[中图分类号] R592 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）06（b）-0010-03 　　压疮是临床老年患者常见的并发症之一，发生压疮的老年患者病死率明显高于未发生压疮的老年患者。随着人们对营养与压疮关系认识的加深，寻找早期营养干预的靶点，筛选具有较高临床效用的免疫营养素，实施针对性营养干预逐渐引起重视。鱼油因富含ω-3多不饱和脂肪酸（ω-3PUFAs）已成为近年来免疫营养素中的研究热点。它不但可以在体内氧化供能，而且还可以参与细胞结构的组成和物质代谢，影响细胞膜的结构及某些代谢产物的变化，从而调控机体的炎症反应和免疫功能[1]。本研究通过复制老年大鼠Ⅰ期压疮模型，探讨鱼油对老年Ⅰ期压疮大鼠细胞免疫、炎症反应及细胞凋亡的影响及其机制，为老年压疮的预防提供实证依据。现将研究报道如下： 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物与分组 　　喂养16个月的SPF级雄性SD大鼠（相当于65岁老年人）20只，体重330～620 g，购自湖北实验动物有限责任公司，许可证号：SCXK（鄂）2008-0004。将大鼠随机分成3组，正常组和模型组各6只，鱼油干预组8只。正常组和模型组大鼠均采用普通饲料，自由采食饮水方式喂养。鱼油干预组给予普通饲料加1.6/（kg·d）鱼油灌胃喂养20 d。动物饲养室的温度为22℃，湿度为50%。在实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。 　　1.2 实验仪器及试剂 　　1.2.1 主要仪器 日本Olympus DO70显微镜，KD202A 石蜡切片机，DY89-1电动玻璃匀浆机，海尔D386 -70℃超低温冰箱，Sigma K-31冰冻离心机，HMIAS-2000彩色图文分析系统。 　　1.2.2 主要试剂 精致鱼油[5%二十碳五烯酸（EPA）和75%二十二碳六烯酸（DHA）]购自南京森海生物油脂有限公司，双蒸水由实验室自制白细胞介素-2（IL-2）、IL-6、一氧化氮（NO）及一氧化氮合酶（NOS）测定试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供；细胞凋亡试剂盒由江苏碧云天生物技术研究室提供。 　　1.3 动物模型及标本采集 　　20只老年SD大鼠均禁食12 h，用10%水合氯醛按300 mg/kg腹腔注射麻醉后，将模型组、鱼油干预组大鼠仰卧于自制简易加压装置上， 造模参照文献[3]方法和参数实施。正常组不造模，直接颈动脉取血后处死。模型组、鱼油干预组取压迫处皮肤和肌肉组织4℃冰盐水洗净，滤纸吸干置于-70℃保存。另取相同部位的肌肉组织，4℃冰盐水中快速洗去血液，10%甲醛液固定、脱水、石蜡包埋、切片，行TUNEL荧光标记。冻存的样品同一天同一批按组织克重∶生理盐水毫升数=1∶9配备成10%肌肉匀浆，4℃环境下以3500 r/min离心10 min，仔细收集上清液保存待测。 　　1.4 检测指标与方法 　　1.4.1 肉眼观察及HE染色光镜下观察 肉眼观察受压部位皮肤的完整性（有无破损及 破损面积大小、深度等）以及皮肤颜色。DP70光镜下取400倍视野观察受压部位皮肤和肌肉组织病理学变化并进行显微照相。 　　1.4.2 IL-2及IL-6含量检测 用干燥管收集各组大鼠全血，-4℃条件下，2500 r/min离心10 min，提取上层血清，-80℃分装冻存。使用RD公司提供的ELISA试剂盒在雷杜RT-6500酶标仪上检测各组血清中IL-2、IL-6