结肠癌HT29细胞三维培养模型建立及群集耐药研究-第三军医大学学报.DOC

论著 融合肽-pTEM-8复合颗粒性疫苗的制备和鉴定 刘平，梁后杰，阮志华，郑晨宏，杨曌，邹岚，何建明，边志衡(第三军医大学西南医院肿瘤科 ,重庆 400038) 摘 要： 目的 制备、鉴定基于肿瘤抗原TEM-8（tumor endothelial marker-8）的复合颗粒性疫苗。方法 在特定的条件下将阳离子肽和DNA制备成模拟病毒颗粒样的结构，并以扫描电镜、DNA阻滞试验、DNaseI保护试验和免疫印迹（Western blotting）对该疫苗进行制备鉴定。结果 在NaCl浓度为87.5mmol/L,电荷比为2的制备条件下，在电镜下显示该疫苗能形成颗粒，并可有效介导TEM-8蛋白表达。结论 本研究成功制备了基于肿瘤抗原TEM-8的复合颗粒性疫苗，为新型的抗肿瘤疫苗的研究奠定了基础。 关键词： 阳离子肽；疫苗制备；疫苗设计 中国图书资料分类号： 　文献标示码： Preparation and identification of mimovirus tumor vaccine based on TEM-8 LIU Ping, LIANG Hou-jie, RUAN Zhi-hua, ZHENG Chen-hong,YANG Zhao ,ZOU Lan ,HE Jian-ming, BIAN Zhi-heng .(Department ofOncology, SouthwestHospital, ThirdmilitaryMedicalUniversity, Chongqing 400038, China ) Abstract: Objective To prepare and identify the mimovirus tumor vaccine based on TEM-8. （tumor endothelial marker-8） Methods Under specific condition, peptide and DNA were condensed into like-virus particle, and the preparing parameters were optimized by assays of DNA gel retardation, DNase I protection and identified by Western blotting.. Results The vaccine was condensed into homogeneous particles at charge ratio of 2 in 87.5mmol/L NaCl concentration, which could effectively medicate expression of the genes carried by vaccine particles. Conclusion：The mimmovirus tumor vaccine based on surviving was prepared successfully, providing a good foundation for the design of new tumor vaccine. 　Key words：cationic peptide; vaccine preparation; vaccine design 肿瘤的早期微小转移是影响手术、放化疗效果的重要原因，而微小转移灶的进一步生长必须依靠新血管生成[1]。目前的抗血管生成治疗已经用于中、晚期恶性肿瘤患者控制术后残留病灶复发、抑制远处隐性转移病灶等方面。与以往的抗肿瘤血管生成分子治疗策略不同，抗肿瘤血管生成疫苗所介导的免疫治疗是以激活细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)，从而诱导自身的肿瘤特异性免疫应答，识别和针对性清除肿瘤血管内皮细胞，降低肿瘤微血管生成，阻止肿瘤微小转移灶形成，控制肿瘤复发。在诸多种抗肿瘤血管生成疫苗形式中，寻找到特异性高并且有效诱导免疫反应的疫苗，从而降低疫苗产生自身免疫疾病和具有较强的免疫原性是疫苗设计的关键。 阳离子肽类DNA转运载体(cationic peptides DNA delivery systems)是目前DNA转运载体中的新进展。该类DNA转运载体是一些富含正电荷氨基酸的多肽，利用正负电荷吸引原理，与负电荷的pTEM-8结合，形成模拟天然病毒结构的致密颗粒，称为“模拟病毒”瘤苗。该含负电荷的“模拟病毒”瘤苗易于被真核细胞摄入，有效转染细胞并介导目的基因的表达。 TEM-8是被认为在结肠癌血管内皮中具有高特异性的肿瘤内皮标志物。是目前较理想的免疫治疗