肝豆状核变性课题汇报课件.ppt

主要研究开发内容 申请项目的必要性和依据  HLD流行病学调查 本病是较为常见的单基因遗传病，国外Ferenci P等流行病学调查，本病发病率为1/3万人，患病率为15~25/10万人，杂合子为1/100人 国内刘焯霖等对1982～1991年神经遗传性疾病专科门诊统计分析，结果HLD占10.14％，居全部单基因遗传病的第二位 我院统计2010年7月～2011年2月期间427例住院患者，约70%的患者在院外由于误诊误治导致病情加重，甚至因为肝硬化失代偿或/及严重脑损害导致残疾和死亡 国内外有关文献在治疗HLD肝纤维化现状 国内外有关文献在治疗HLD肝纤维化尚属空白，已报导的药物尚无一种被正式批准应用于临床抗肝纤维化，这是因为 干细胞干预肝纤维化的研究现状 骨髓间充质干细胞治疗肝损害的优势 骨髓间充质干细胞取材方便，来源丰富 分化能力强 免疫原性低 没有伦理学障碍，不受道德及法律方面的限制 具有跨胚层向多组织细胞分化的潜能和自我更新的高增值能力。 本课题意义 骨髓来源的间充质干细胞治疗肝豆状核变性导致的肝纤维化的安全性和有效性还需进一步的评估 探讨骨髓间充质干细胞移植治疗该病肝纤维化的机制也具有重要的意义 实施方案 采用临床试验方法，将病人分为三组: 青霉胺组 骨髓间充质干细胞移植干预组; 骨髓间充质干细胞移植干预加青霉胺组。 随访1-2年；治疗后3、6、9、12个月观察患者日常生活能力评价、临床分级评价、细胞因子、基质金属蛋白酶、肝铜含量变化、治疗1年后肝组织活检进行病理检查，所得数据应用SAS处理。 给药方案 青霉胺组：青霉胺(上海信谊制药公司生产)，剂量为每日40mg/kg，连续8～16周 骨髓间充质干细胞移植干预：将3×l06细胞/ml的骨髓间充质干细胞液2ml+生理盐水100ml经静脉移入人体。每10天静脉干细胞移植一次，三次为一个疗程 骨髓间充质干细胞移植干预加青霉胺组：将3×l06细胞/ml的骨髓间充质干细胞液2m+生理盐水100ml经静脉移入人体，每10天静脉干细胞移植一次，三次为一个疗程。另将青霉胺（剂量为每日40mg/kg），每日分3次口服，连续8～16周 标本收集 分别于治疗后3、6、9、12个月抽取病人外周血1.2ml，用于细胞因子、基质金属蛋白酶、肝铜含量检测； 治疗后1年进行肝脏组织病理检查 观察指标与方法 取血1.2ml，血标本经低速冷冻离心(3000转/分)10分钟后取血清约0.5ml进行有关实验项目检测。如：血清生化、肝纤维化指标及相关细胞因子检测 血清铜蓝蛋白采用免疫比浊法，ALT采用比色法，LN、HA采用放射免疫法(RIA)，PDGF、 TGFβ1、IL-10、TNF-α、MMP-1及TIMP-1采用ELISA法 肝脏组织病理检查:肝脏标本均作连续切片，每份标本均行下述检查：普通HE染色、胶原纤维采用Masson氏染色、网状纤维采用Gomori染色 肝脏组织铜含量测定采用原子吸收分光光度法检测 统计学分析 数据应用SAS处理，各组间比较采用one way ANOVA 分析 关键技术 肝脏穿刺可能会给病人带来一定的痛苦和创伤，我们将请有经验的临床医生在彩超监测下进行活检 建立一套稳定的检测细胞因子、基质金属蛋白酶、肝铜含量方法直关重要。本实验室检测基质金属蛋白酶时，出现不稳定的现象，对于这一问题，我们正请有关专家帮助建立稳定、可靠的方法 技术路线 本项目的特色与创新之处 首次应用人骨髓干细胞移植干预HLD患者，为开展骨髓干细胞移植治疗HLD肝纤维化提供新的 理论、实验依据 已具备的试验手段 南方医科大学附属郑州人民医院2008年成立了院士工作站，并开展了干细胞治疗。与此相适应的投入一千万元建立了一个现代化试验室，配备了先进的试验设备。有能力提供高质量、高活性的细胞 该研究与我们刚获得的国家自然基金项目可以共享试验设备和人力资源，我们又投入500多万元，购买了与试验相关的设备， 如ABI3730XL序列仪、高速冷冻离心机、流式细胞仪、PCR仪、分子生物学平台、高速离心机、悬涡振荡器，磁力搅拌器，PH计，立式高压消毒锅，微波炉等 院士工作站具备完成本课题所需的条件 已具备的技术力量 项目的预期经济、社会和环境效益 通过以下三方面的研究 评价骨髓间充质干细胞治疗HLD患者的安全性和有效性（血常规、尿常规、肝肾功能） 探讨经人静脉骨髓间充质干细胞移植干预肝纤维化的病理过程 观察骨髓间充质干细胞对多种肝纤维化指标、细胞因子、基质金属蛋白酶、肝铜含量的影响及肝组织光镜、电镜的病理改变 项目的预期经济、社会和环境效益 本项目可取的以下几项成果 客观评价骨髓干细胞移植治疗HLD肝纤维化的安全性和有效性。 初步探讨骨髓干细胞移植对HLD肝纤维化干预的作用