第七章 酶制剂生产.pptVIP

第八章 酶制剂生产 前言 20世纪20年代，法国人Biondin与Effront 在德国建厂生产枯草杆菌淀粉酶来代替麦芽淀粉酶，用于棉布褪浆，为微生物酶的工业生产奠定了基础。 40年代，抗生素工业兴起，深层培养技术不久就被用于淀粉酶的制造，使酶制剂工业跨进了工业化生产的时代。50 年代末，糖化酶成功用于葡萄糖生产，革除了沿用上百年的酸水解工艺。 60年代中期，加酶洗涤剂大流行，进一步促进了酶制剂工业的发展。70年代初固定化葡萄糖异构酶用于生产果脯糖浆，大大推动了食品工业与酶制剂工业的发展。随着酶制剂的普遍应用与固定化酶的广泛研究，促进了生物催化技术与化学工程密切结合，诞生了一门新学科酶工程 1971年在美国召开第一次国际酶工程会议，把大规模生产、分离提纯、固定化技术、酶反应器设计，以及酶的工业应用都纳入了酶工程的范围，并成为当时（20世纪70年代至80年代中期）初生物技术五大技术体系中最活跃、发展最快、成效最大的一个体系。 第一节　酶制剂的工业化生产 一、工业化酶制剂生产的优点 自1894 年米曲霉高峰淀粉酶 问世，1923年枯草杆菌а-淀粉酶工业化应用以来，微生物酶制剂工业逐渐发展成为一个新兴的产业部门，发展势 头方兴未艾。目前的800多种商品酶中，大多数是利用微生物生产的。 利用微生物发酵法大规模生产酶制剂，具有以下几个明显的优点。 优点 （一）酶的品种多，新酶种易得 微生物种类繁多，凡是动植物体内存在的酶，几乎都能从微生物中得到；倒是有许多酶目前还只在微生物中发现，而未能从动植物中找到。 （二）菌种易诱变，代谢易调控 微生物代谢方式各种各样，又极易受外界因素的影响，很容易通过诱变等简便的育种方法改变原来的代谢途径，得到预想的代谢途径，实现代谢的人为调控。 （三）生产周期短，酶的产量大 微生物细胞构造简单，没有分化的营养器官，而是以细胞表面直接与环境接触，所以代谢速度比高等生物快得多，其繁殖速度快，生产效率高，生产周期短，培养简便，并可通过控制培养条件提高酶的产量。相比动植物组织酶提取，不受动植物原料量和来源的约束，周期短，产酶量大 （四）基因易操纵，优质种易得 基因工程技术中，以微生物为对象的研究水平远远领先于动植物，进行微生物的基因改造要比动植物方便得多，技术水平也成熟得多。生物技术在酶工程中的应用（如多拷贝酶基因的菌种）远远领先于其他工程体系，早已产业化，并产生了巨大的经济效益和社会效益。 二、酶制剂生产的基本工艺流程 （一）基本工艺流程图 微生物发酵法生产酶制剂，分固态发酵法、液态发酵法和载体发酵法三大类。由于载体发酵法还没有用于大规模生产，以介绍固态发酵和液态发酵为主。 虽然因为具体的生产菌不同、目的酶不同、生产设备不同、生产条件不同，采用的工艺有所不同，但酶制剂生产基本工艺流程大致如图8-1 第二节 淀粉酶 淀粉酶是水解淀粉物质的一类酶的总称，广泛存在于动植物和微生物中。它是最早实现工业化生产并且至今为止应用最广、产量最大的一类酶制剂。 按照水解淀粉方式不同，可将淀粉酶分为四大类：а淀粉酶、 β淀粉酶、葡萄糖淀粉酶和解枝酶（异淀粉酶）。 此外，还有一些与工业有关的淀粉酶如环化糊精生成酶（这种酶可使6、7个葡萄糖构成环化糊精）、G4、G6生成酶（可从淀粉非还原端切割下4-6个葡萄糖分子构成寡糖），还有а-葡萄糖苷酶，又称葡萄糖苷转移酶（可将游离葡萄糖转移到其他葡萄糖基的а-1,6 位上，生成含а-1,6糖苷键的寡糖）。 一、 а-淀粉酶 工业上大规模生产和应用的а-淀粉酶主要来自细菌和曲霉，特别是枯草杆菌，我国淀粉糖化工业使用的液化酶BF-7658 、美国的enase 等属于这一种 。 由微生物制备酶制剂，产酶量高，易于分离和精制，适于大量生产。当然亦能从植物和动物 中提取а- 淀粉酶，满足特殊的需要，但由于成本高，产量低，目前还不能实现工 业化生产。具有实用价值的а-淀粉酶生产菌列于表8-1 由于菌种不断的选育改良，现在工业生产上用的菌种产生а-淀粉酶的能力已是原始菌株的数倍乃至数十倍 霉菌а-淀粉酶大多采用固体曲法生产:麸皮为主要原料，米糠或豆饼的碱水浸出液，以补充氮源;32-35℃培养36-48h,40 ℃烘干或风干,粗酶 细菌淀粉酶则以液体深层发酵为主:以麸皮、玉米粉、豆饼粉、米糠、玉米浆等为原料，补充无机氮源,此外还需添加少量镁盐、磷酸盐、钙盐等。37℃通风搅拌培养24-28h,离心或以硅藻土作助滤剂除去菌体及不溶物。在钙离子存在下低温真空浓缩后，加入防腐剂、稳定剂以及缓冲剂后就成为成品。这种液体的细菌а-淀粉酶呈暗褐色，带不愉快的臭味，在室温下放置数月而不失活。 为制备高活性的а-淀粉酶，并使贮运方便，可把发酵滤液用硫酸铵盐析或有机溶剂沉淀制成粉状酶制剂