实验九微生物快速检测.pptVIP

实验九 利用显色培养基检测常规细菌 食品安全快速检测实验室 2011.11 1、样品处理：取样品25mL（g）放入含有225mL灭菌磷酸缓冲液稀释液（或生理盐水）的取样罐或均质杯内，制成1:10的样品匀液，必要时用1mol/LNaOH或1mol/L?HCl溶液调节样品匀液pH至6.6～7.2。用1mL灭菌吸管吸取1:10样品匀液1mL，注入含有9mL稀释液的试管内，振摇后成为1:100的样品匀液，以此类推，做出1:1000等稀释度的样品匀液，每次换一支吸管。 2、接种：一般食品选2～3个稀释度进行检测，含菌量少的液体样品（如饮用纯水和矿泉水等）可直接吸取原液进行检测。将菌落总数测试片（BB202）置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1mL样品匀液慢慢均匀地滴加到纸片上，然后再将上层膜缓慢盖下，静置10s左右使培养基凝固，每个稀释度接种两片。同时做一片空白阴性对照。 3、培养：将测试片叠在一起放回原自封袋中并封口，透明面朝上水平置于恒温培养箱内，堆叠片数不超过12片。一般食品培养温度为36℃±1℃，培养15～24h；水产品培养温度为30℃±1℃，培养48h。 大肠菌群检测： ??? 1 接种：用灭菌吸管吸取10mL水样插入装有大纸片的塑料薄膜袋中，均匀涂布，共做5个重复；分别取1mL水样加到小纸片中，共接5个重复；另取1mL水样加到9mL灭菌生理盐水中混匀，用1mL灭菌吸管分别吸取1mL（即0.1mL水样），加到最后5片小纸片中。?????? 2 培养：将接种好的纸片放于培养箱中，36℃±1℃培养15～24h。? ? 细菌在测试片上生长后会显示红色斑点，选择菌落数适中（30～300个）的测试片进行计数，乘以稀释倍数后即为每毫升（或每克）样品中所含的细菌菌落总数。 菌落总数计数原则及报告方式 ???????4.1、若只有一个稀释度纸片上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个纸片菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每毫升(或克)样品中菌落总数结果。?????? 4.2、若有两个连续稀释度的纸片菌落数在适宜计数范围内时，按式(1)计算:?????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????? ???????????????????????? ?? 式中：?????? N——样品中菌落数；?????? ∑C——测试片上(含适宜范围菌落数的测试片)菌落数之和；?????? n1——第一个适宜稀释度测试片数；?????? n2——第二个适宜稀释度测试片数；???????? d——稀释因子(第一稀释度)。???????示例：???????????????????????????????????????????????????????? ?????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????? 上述数据经“四舍五入”后，表示25000或2.5×104。???? ??? 4.3、若所有的稀释度菌落总数均大于300CFU，则对稀释度最高的测试片进行计数，其他测试片可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。??????? 4.4、若所有的稀释度菌落总数均小于30CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。??????? 4.5、若所有的稀释度（包括液体样品原液）均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。??????? 4.6、若所有稀释度的平均菌落数均不在30CFU～300CFU之间，其中一部分小于30CFU或大于300CFU，则以最接近30CFU或300CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。?????? ?4.7、菌落总数的报告?????? ??? 4.7.1、菌落总数在100CFU以内时，按“四舍五入”原则修约，采用两位有效数字报告。?????????? 4.7.2、大于或等于100CFU时，第三位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前两位数字，后面的0代替位数，也可用10的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。???? ????? 4.7.3、若测试片上一片红色无法计数时，则报告多不可计。?????????? 4.7.4、若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。?????????? 4.7.5、称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报告。 ? 观察每片颜色变化，若纸片变黄或在黄色背景上呈现红色斑点为大肠菌群阳性，若纸片保持紫蓝色不变或在紫